Прополис - книга-часть 1

               АПИМОНДИЯ

ПОСТОЯННАЯ КОМИССИЯ ПО ТЕХНОЛОГИИ ПЧЕЛОВОДСТВА
И ПЧЕЛОВОДНОМУ ОБОРУДОВАНИЮ

Ценный продукт пчеловодства:

ПРОПОЛИС

Издание четвертое, переработанное и дополненное

БУХАРЕСТ

ПРЕДИСЛОВИЕ

Издание книги по пчеловодству или связанным с этим занятием темам ныне как будто представляет больший интерес для широких масс чем для самих пчеловодов. Это объясняется стремлением совре­менного человека к все более широкому и разнообразному использо­ванию естественных продуктов. Пчелы предоставляют ему широкую гамму биологических продуктов, применяемых в питании человека и для охраны его здоровья.

Пять лет спустя после появления сборника «Прополис», Изда­тельство АПИМОНДИИ предлагает читателям новое, дополненное издание. Данный сборник содержит доклады о прополисе, предста­вленные на ряде симпозиумов по апитерапии, организованных под эгидой Международной Федерации пчеловодных объединений АПИ­МОНДИИ в Братиславе в 1972 году, Мадриде в 1974 году, Гренобле в 1975 году и Бухаресте в 1976 году, а также опубликованные в по­следние годы статьи по биохимии, биологии, технологии данного продукта пчеловодства.

Прополис — работа монографического характера, посвященная этому менее известному продукту улья, высоко ценимому за. бла­готворные эффекты на жизнедеятельность пчелиных семей и широко ; используемому в народной медицине. В результате его пропагандиро­вания в специальных изданиях и проведения экспериментальных работ прополис приобрел известность и среди врачей.

Издательство АПИМОНДИИ постаралось дать как можно более полную информацию об этом продукте пчеловодства с тысячелетней давностью в эмпирической терапевтике; исследования, еще несколько лет случайные, значительно расширившиеся в последние годы дают научно-обоснованные указания. Так объясняется включение в это

четвертое издание материалов, кажущихся гетерогенными. Мы опубли­ковали материалы в их оригинальной форме стремясь предоставить производителям с одной стороны и фармацевтам, химикам и врачам с другой, информационно-документальный материал о нынешней ста­дии знаний о прополисе и перспективах его дальнейшего исполь­зования.

Первое и второе издание сборника вызвало большой интерес как у широкой публики, так и у исследователей и специалистов, о чем свидетельствует большое число докладов о прополисе, представленных на втором международном симпозиуме по апитерапии, Бухарест, 1976 и III симпозиуме по апитерапии в Портороже, Югославии, 1978 г.

Как мы предполагали в предисловии предыдущего издания работы «Прополис», 1980 г., тираж был исчерпан за очень короткое время.

Учитывая огромный спрос на эту книгу, АПИМОНДИЯ решила ее переиздание включая и доклады о прополисе, представленные на III международном симпозиуме АПИМОНДИИ по апитерапии, Порто­рож, Югославия, 1978 г.

Часть этих работ дана в резюме. Заинтересованные лица могут найти полный текст докладов в сборнике «III международный симпо­зиум по апитерапии, Порторож», изданном АПИМОНДИЕЙ в 1979 г. Вопросам апитерапии будет уделено и впредь большое внимание.

Мы считаем, что АПИМОНДИЯ выполняет свой долг пред­ставляя врачам, пчеловодам и всем потребителям новейшие и наиваж­нейшие данные об этом чудном продукте улья.

Мы уверены, что читатели хорошо примут IV издание сборника «Прополис» и ждем с интересом от них предложения и идеи в связи с возможным новым переизданием книги об этом важном продукте пчеловодства.

Бухарест, май 1981 г.

Проф. д-р инж. В. ХАРНАЖ Президент АПИМОНДИИ

ОБОБЩАЮЩИЕ ДОКЛАДЫ

НЕКОТОРЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ

ДАННЫЕ О ПРОПОЛИСЕ, СОБИРАЕМОМ В РУМЫНИИ

Вера БОЕРИУ, Аделина ДЕРЕВИЧ РУМЫНИЯ

Прополис — вырабатываемый пчелами натуральный продукт с еще не выясненным полностью сложным химическим составом.

Так как продукт происходит с разных растений, его химический состав бывает разным. Это побудило некоторых исследователей произ­вести химический анализ прополиса, собранного в разных областях.

Из-за ценности биологической активности этого продукта, глав­ным образом антимикробной деятельности, и применения его в меди­цине и ветеринарии, исследование химического состава и идентифици­рование соединений, ответственных за. биологическую деятельность, представляет большой интерес.

Ныне есть много интересных работ по исследованию химического состава прополиса (1) (3) (4) (7) (8) (10) (11).

В данной работе, используя метод хроматографии, электрофоре­за, адсорбции в ультрафиолетовых лучах и ряд химических реакций мы задались целью исследовать химический состав собранного нами прополиса по содержанию протеиновых соединений, производных ну­клеиновых кислот и соединений, растворимых в органических раство­рителях.

Материал и методика

В первой серии опытов мы попытались проанализировать фрак­цию, экстрагируемую путем обработки водой при повышенной темпе­ратуре, определить наличие флавоноидов, адсорбцию в ультрафиоле­товых лучах и проанализировать , остаток после обработки прополиса водой.

С этой целью 15 г прополиса (схема 1) обрабатывают 80 мл бидистиллированной воды в фарфоровой капсуле и постепенно нагре­вают и кипятят в течение трех минут. Затем содержание капсулы охлаждают в холодильнике. Теплое экстрагирование и охлаждение производят троекратно. После охлаждения воду фильтруют. На филь­тре остается компонента А, нерастворимая в холодной воде, которую помещают в сушильный шкаф и затем взвешивают, чтобы определить процентное содержание.

Пробы фракции А растворили в смеси хлороформа с метанолом 80:20 и подвергли анализу путем круговой хроматографии на бумаге и тонкослойной хроматографии. Фильтрат, получаемый после фильтрования охлажденной воды — это фракция В. Эта фракция содержит соединения, экстрагирован­ные водой при повышенной температуре, которые остаются раствори­мыми и в холодной воде.

Эту фракцию (В) подвергли следующим анализам : реакции на присутствие флавоноидов при использовании NаОН  2н или Н2SО4 согласно (11) и адсорбцию в ультрафиолетовых лучах, причем пробы определяли между 370 мкг и 230 мкг.

Остаток после обработки прополиса водой при повышенной тем­пературе помещают в сушильный шкаф, измельчают несколько раз по мере сушения и взвешивают до получения примерно устойчивого веса, для определения содержания в процентах.

Фракция, меченая Б, представляет собой нерастворимый остаток, остающийся после троекратной обработки водой при повышенной температуре.

Схема 1 — ДИАГРАММА ТЕХНИКИ, ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ
РЯДА ФРАКЦИИ ИЗ ПРОПОЛИСА

16 г прополиса

троекратно экстрагируют водой при Ш0°. Охлаждение

фильтрование

* фильтрат содержит растворимое в воде соединение (В)

' >

на фильтре остается не­растворимое в воде соеди­нение (А)

'растворение в этаноле при 70—80° теплое фильтрование охлаждение

остаток после экстраги­рования водой при 100* Ш)

I- > Обработка

нерастворимое в этаноле соединение (С)

ацетоном 5 раз

\

ацетоновая
фракция (Е)

5 граммов остатка Б экстрагируют в пяти приемах, используя каждый раз по 150 мл ацетона, при комнатной температуре, в защи­щенном от света месте. Ацетоновые, вытяжки соединяют и они пред­ставляют собой ацетоновую фракцию Е, подвергаемую круговой хро­матографии на бумаге и тонкослойной хроматографии.

Нерастворимую фракцию А растворяют в 80 мл этанола и на­гревают до 70—80°. Фильтруют при 70°, а полученный фильтрат охлаждают в холодильнике. Нерастворимое в холодном этаноле сое­динение выделяют путем холодного фильтрования и помещают в сушильный шкаф до получения константного веса, для определения процентного содержания. Эта фракция, меченая С, содержит соедине­ния, растворимые в этаноле при 70°—80° и нерастворимые в холодном этаноле.

Пробы фракции С проанализировали путем круговой хромато­графии на бумаге и тонкослойной хроматографии.

вЧто касается использованных методов, круговая хроматография на бумаге осуществлялась по указаниям ХОРАЧЕКА и ЧЕРНИКОВА (5) при использовании для трех миграций : смеси хлороформ а-мета- нола 80:20 (первая миграция), ацетона (вторая миграция) и мета­нола (третья миграция).

Круги из бумаги Ватмана № 1, в которые вписаны три кружка для трех миграций, двухкратно промывали смесью, хлороформа-мета- нола 80 : 20. Проявляли осмиевой кислотой.

Схема 2 — ПОЛУЧЕНИЕ ФРАКЦИИ ПРОПОЛИСА, ИЗ КОТОРОЙ УДАЛИЛИ
СОЕДИНЕНИЯ, РАСТВОРИМЫЕ В ОРГАНИЧЕСКИХ РАСТВОРИТЕЛЯХ

2 г прополиса, обработанного

ацетоном >(20 дней), этанолом |16 часов), метанолом (72 часа)
сухой остаток

100 мг экстрагируют водой 50 мл экстрагируют трихлоруксуской

с рН 8 (1Е)               кислотой 5% при 90® |(ИЕ)

Тонкослойную хроматографию производили на пластинках 20Х Х20 см, покрытых силикагелем Н и активированных в течение часа при 110°. Используемая система миграции — смесь циклогексан-аце­тата этилхлороформа 40:15:1. Проявляли молибденовой кислотой 10% в метаноле и нагревали 5—10 минут до 120°.

Во второй серии опытов мы попытались исследовать наличие в прополисе протеиновых соединений и производных нуклеиновых кислот

—    рибонуклеиновой и дезоксирибонуклеиновой.

2  г прополиса обрабатывают пятикратно 5 мл ацетона в течение 20 дней при комнатной температуре, в защищенном от света месте. Ацетонные вытяжки удаляют. Затем следует обработка остатка про­полиса этанолом в течение 16 часов, затем метанолом в течение 72 ч. Прополис, обработанный таким образом, пропускают через фильтро­вальную бумагу, несколько раз промывают этанолом и выпаривают до полного сушения. Эту фракцию прополиса, из которой удалили соеди­нения, растворимые в вышеупомянутых органических растворителях,

—    серовато-белый продукт, меченый как фракция Г. Эту фракцию проанализировали для обнаружения протеиновых соединений и произ­водных нуклеиновых кислот.

С этой целью 100 мг фракции Г экстрагировали 3 мл бидистил- лированной воды с рН 8 в течение часа. В полученном фильтрате (I Р) произвели реакцию Мейбаума с орцинолем (6), реакцию Диша с дифениламином (2), адсорбцию в ультрафиолетовых лучах от 370 мкг до 230 мкг и электрофорез на полиакриламидном геле.

Для реакции Мейбаума пробы производили 0,6 мл фильтрата и 0,2 мл реагента Мейбаума, а для реакции Диша использовали 0,6 мл фильтрата и 0,6 мл реагента Диша.

Электрофорез на полиакриламидном ' геле производили 0,2 мл фильтрата в трубке, буферный раствор трис-борной кислоты рН 8,2, время миграции — 3 часа 30 мин. Проявляли черным крахмалом.

Отдельно брали 50 мл фракции Г, которую экстрагировали 2 мл трихлоруксусной кислоты в течение 15 минут при 90° по Шнейдеру (9). После центрифугирования в надосадочной жидкости (II Г) произво­дили реакции Мейбаума и Диша и адсорбцию в ультрафиолетовых лучах.

В последней серии опытов мы попытались обнаружить в пропо­лисе соединения, растворимые в органических растворителях, а имен­но в хлороформе и метаноле.

6 г прополиса обрабатывают два раза в течение 48 часов хло­роформом при комнатной температуре, в защищенном от света месте. Объединенные вытяжки образуют хлороформную фракцию (С).

Схема 3 — ПОЛУЧЕНИЕ ДВУХ ФРАКЦИИ ИЗ ПРОПОЛИСА:
ХЛОРОФОРМНОЙ И МЕТАНОЛОВОИ

6 г прополиса двухкратно   6 г прополиса двухкратно

обрабатывают хлороформом   обрабатывают метанолом

I хлороформная фракция ;(0)

I метаноловая фракция (Н)

в течение 48 часов   в течение 48 часов

Другую пробу прополиса экстрагировали метанолом в таких же условиях. Эта вытяжка — метаноловая фракция (Н).

Эти две фракции проанализировали при помощи круговой хрома­тографии на бумаге и тонкослойной хроматографии.

Результаты наших исследований выявили сложность химического состава проанализированного нами прополиса. Рис. 1 — Круговая хроматография на бумаге фракций О, Н, А, С, Е, экстрагированных из прополиса

Результаты и обсуждение

Рис. 2          — Тонкослойная хроматография фракций О, И, А, С, Е, экстрагированных из прополиса

Рис. 3 — Электрофорез на полиакриламидном геле фракции №, экстрагиро­ванной из прополиса

Используя в качестве методов анализа круговую хроматографию на бумаге, тонкослойную хроматографию и электрофорез на полиа­криламидном геле, адсорбцию в ультрафиолетовых лучах и химические реакции Мейбаума и Диша, нам удалось продемонстрировать наличие ряда соединений, различающихся по химической природе или физико­химическим свойствам. При обработке прополиса хлороформом и ме­танолом удалось выявить наличие групп соединений, отличающихся по растворимости в органических растворителях и числу содержа­щихся в них соединений.

В первую очередь установили, что хлороформная вытяжка про­полиса (О), проанализированная путем круговой хроматографии на бумаге, содержит три группы соединений, отличающихся раствори­мостью, а именно : 1. соединения, растворимые в смеси хлороформа и метанола и нерастворимые в ацетоне или метаноле (эти соединения мигрируют в круг 1), 2. соединения, растворимые в ацетоне и нера­створимые в метаноле (мигрируют в круг 2), 3. растворимые в мета­ноле соединения (мигрируют в круг 3) (рис. 1, С). Путем тонкослой­ной хроматографии на пластинке в хлороформной вытяжке обнару­жили наличие 9 пятен (рис. 2, О).

АНАЛИЗ ФРАКЦИИ ПРОПОЛИСА. Содержание Реакция для флавокоидов Реакция с орцнно- лем Реакция с дифе­нилом 1. Фракция, нерастворимая в воде 10% 2. Фракция, растворимая в воде (В) NаОН2н++ На80« + 3. Фракция, растворимая в эта­ноле при 70—80° и нераство­римая в холодном этаноле (С) 3.7% . 4. Остаток прополиса после эк­страгирования водой при 100° (О) 78% 5. Ацетоновая фракция остатка О прополиса (Е) 6. Фракция, экстрагированная во­дой с рН 8 из прополиса, об­работанного ацетоном, этано­лом, метанолом (1Г) + 7. Фракция, экстрагированная трихлоруксусной, кислотой 5% при 90° из прополиса, обра­ботанного ацетоном, этанолом и метанрлом (ИГ) ++ 8. Хлороформная фракция (С) 9. Метаноловая фракция (Н)

В отличие от хлороформной вытяжки, метаноловая вытяжка выявленная круговой хроматографией на бумаге обнаружили единую группу соединений, мигрирующих в круг 3, то есть растворимый мета­нол (рис. 1, Н), который в наших условиях работы — тонкослойной хроматографией двух вытяжек — хлороформной и метаноловой указал на наличие 9 соединений (рис. 2, Н). Установили, что тонкослойная хроматография двух вытяжек — хлороформной и метаноловой раз­личается.

Как мы уже отмечали, фракцию А получают путем экстрагиро­вания водой при повышенной температуре и сепарируют из воды путем охлаждения. Эта фракция представляет собой 10% общего содержа­ния прополиса. Анализ фракции А двумя хроматографическими мето­дами указывает, что она содержит также соединения, растворимые в

Адсорбция в уль­трафиолетовых лучах	Электрофорез на полиакриламидном геле	Круговая хроматография па бумаге	Тонкослойная хроматография
		соединения, растворимые в: хлороформметаноле, ацетоне, метаноле	9 пятен
максимум 300 мкг
		соединения, растворимые в смеси хлороформ- метанола, ацетоне	3 пятна
			^   ■:            г,-
: ■ ■'" .	•. !	Соединения, растворимые в метаноле                  -	9 пятен
нет максимума от 370 до 230 мкг	8—9 фракций	■ т .... : .■■■.:■ ■ '
		. - . ■ .. :
нет " максимума ОТ 370 до 230 мкг ■; ■	■ ‘; ■'Л .г,'	\              ’ л; т'. I ... ; ,  >.
- - \		Соединения растворимые: в смеси Хлоформ-мета- нола, ацетона, метанола	11 пятен
............ .........  ;,1          .. ...м	ЛЮ	Соединения, растворимые в метаноле	11 пятен

ЭКСТРАГИРОВАННЫХ РЯДОМ РАСТВОРИТЕЛЕЙ

Таблица 1

хлороформ-метанолу соединения, растворимые в ацетоне и соедине­ния,растворимые в метаноле, то есть соединения, мигрирующие в круги 1, 2 » 3 Дрис. 1, А}, а путем;тонкослойной; хроматографии; уста* навливают наличие девяти пяте» (рис. 2, А).

Анализ фракции В, растворимой в холодной воде, выявил нали­чие флавоноидов, с положительной реакцией с NаОН 2К и концентри­рованным Н2ЗО4 (таблица 1).

Фракция А — комплексная. Она содержит воск и другие ком­поненты,, , которые сепарируются одновременно с воском после охлаж­дения воды,

Фракция С, растворимая в теплом этаноле и нерастворимая--Гр холодном этаноле представляет собой 3,7% общего содержания, про­полиса. Хроматография на бумаге выявилд две группы соединений;

соединения, растворимые в смеси хлороформа-метанола, но нераство­римые в ацетоне или метаноле и соединения, растворимые в ацетоне (рис. 1, С).

| Путем тонкослойной хроматографии фракция С выявляет нали­чие 3 пятен (рис. 2, С).

| ''Остаток после обработки прополиса трехкратно промывают во­дой при повышенной температуре и после сушения он составляет 78% 'общего.прополиса (фракция И).

I Фракцию Б многократно экстрагировали ацетоном. Анализ объединенных кцетоновых вытяжек (фракция Е) указывает, что |путём~'хрГ^матбг~йафии на бумаге устанавливают наличие одной группы (соединений, мигрирующих в круг 3, то есть соединений, растворимых |в метаноле (ри^. 1, Е). Это не исключает возможности растворения |и- в- нервъга -растворителях используемых для хроматографии -на-бума^ |ге. Тонкослойная хроматография фракции Е указала| что последний содержит 9 соединений, так как проявленные хроматограммы указал^

на наличие 9 пятен (рис, 2, Е). Установили, что фракция Е содержит;

оченц.^здо соединений, которш.чущ.алцди путем экстрагирования водой при повышенной температурежаютерык мы обнаруживаем в фракциях!

А„и~-С-4р^й€-"-2-г-А                ---------------- —[----------------------------- ———|

Во второй серии анализов мы пьралйЖ^иЙЙ:1ё;б)га^,ЩЦЩ|йрЙ (состав прополиса как в отношение протеиновых соединений^ так и( (производных нуклеиновых кислот. |            _         !............................. |

1   'Для "этого" !Ш)бх6дим6""п6луадть^гв|з прополиса фр|аШйоГйз'1^^

(рой нужно удалить все соединения, кфторые могут пЬмещар^фетщ^ ствлению электрофореза или реакций |с орцинолем ифи1>дифВНида®Ш-| |ном. С этой целЬю из прополиса удалили растворимые! в органически^ растворителях фединения, а раствори_тклд.&ыбарали.з!..замС1}М.ас,ти..о.т;

^и ДИФ.ФйРР«.®РММ9Й.гСр4^{со6ности} экстрагирования. Для; ртого избрали [толщам #рф»ичешиев растворители, умешиваемые с| (водой. Электрофореэчвдаи дшм&ршацидном геле врдной вытяжки!

стоном и метанолом указал* наофцардрование 8—9 фракций, которые Ькрасилй-аернык.крахмалом^(рис,-^).--0.тмечаем₁4то-А;.ДЕ^ЕВИ.Ц..(1)₁^! исследуя химический состав аминокислот этого же прополиса в ре­зультате кислогоигидроямэз]чешймла прйиэдэмрщй'^оталографйцойа б у шше шдглиу ие^ 8 тштктлот. «Что ка с а ется ьсо Дерц< айШ' цршзврдйых нукленифы^окнолод ЙЫК¹*лйнДРН4$т^ы апрр&зрелй'реа’кйрй) ©рцр нолем для рибозы и реакц&кб с-дафейиламннш" дш ндеэояейрибшы; ЯроизведЕтныезаналйаы 'Иомоглш устайовит^, ,§гсД1дал1>|# реакцйя для риртьш ;аказаЛйсЫ Мйябжитёяьй‘Ойа р Роди©»: -'ШтйЖКб' нм> вытяжк#' три¹ хлоруксусной кислоты, в то время как реЬнцйЯ-Зый* ДёзрксирйбОШВ нашяж!усрр1виях5фабот^р>еаза'ла»кЪтрйца*елвшй1, — А квдигфФ

лучах от 370 мкг до 230 мкг этой же фракции (1-Г и, II Г|^й%‘|, 1®Шо?.^нг8Ч6Ч%й^н0'^т%вййсйоть” йШШвй?^й

вМйШ^ШтдрёЯйе ШиШШйоЩШ ^сйИрСТ^^ЙО Ш^лол

Отмечаем, что при адсорбции в ультрафиолетовых лучах водной фракцией В получили максимум адсорбции при 300 мкг. При прове­денных нами анализах установили в первую очередь, что прополис содержит группы соединений, растворимых в органических раствори­телях, отличающихся по растворимости и по содержанию соединений, выявленных при помощи тонкослойной хроматографии. Эти соедине­ния реагировали на окраску осмиевой кислотой и фосфомолибденовой кислотой.

Электрофорез на полиакриламидном геле водной вытяжкой ука­зал на наличие 8—9 фракций, окрашиваемых черным крахмалом, в то время как анализ для определения производных нуклеиновых кислот указал лишь на наличие положительной реакции на рибозу.

Удалось также выявить наличие флавоноидов и максимум ад­сорбции при 300 мкг.

ЛИТЕРАТУРА

1.    ОЕНЕУ1С1 А. — Ппе1е сагасгегЫЩ 1Шсо-сЫт1се а1е ргороИзиШ. Ьисгаге сошцп1саЙ

1а 51трог1опи1 1тета{юпа1 азирга ргоро!1зи1и1. Вга11з1ауа, 1976.

2.    Б15СНЕ 2. — ТесЛп1диез Йе 1аЪогаЮ1ге, уо1. I, нёй. Йе Ьо1ззе1еиг, ЕЙ. Маззоп е1 согар.

Раг1з, 1954

3.    ГКОЗТ 3., 8. АЗКЕК — РиПНег зШсЧез о/ Цаоопо1А рагетпз Ъат1еу, НегейНаз 1973,

4.    НЕШЕИ IV., Н. ЫЗКЕКЗ — Оп Иге оссиггепсе о] Тану асМз гп ргороИз. Ропи§а11а

ас1а Ыо1ой1са, 1971, XII, 1—2, р. 65

5.    НОКАТСНЕК 1., М. ТСНЕМШСОУА — ЕхагМпаОоп о1 Ир1$ 1п Нитпап ВеЬит Ьу ГНзк

сПготаюдгарНу, В1осЬеш. 3. 1959, 71, 417.

6.    МЕ1ВАЦМ VI. — Тес?т{диез йе 1аЪогаКЯге У01. I, г4й. йе Ыззе1еиг, Ей. Маззоп е1

сошр., РаПз, 1954

7.    ПАЛМБАХА С. Е., С. А. ПОПРАВКО — Химический состав и биологическая активность

прополиса. Прополис. Изд. АПИМОНДИИ. Бухарест 1975, стр. 20.

8.    С. А. ПОПРАВКО — Химический состав, происхождение и вопросы стандартизации про­

полиса. Изд. АПИМОНДИИ, Бухарест 1975, стр. 17.

9.    8СНГСЕГОЕВ Ш. — Меюбз (п Епгутоизду, Ей. 31йпеу Р. Р. Со1оуДск апй ИаШап О.

Кар1ап. Асай. Ргезз., 14е1»-Уогк, 1957, р. 620

10.   УШКАЛОВА В.'Н„ О. В. ТОПАЛОВА — Исследование восков прополиса. Прополис. Изд.

АПИМОНДИИ, Бухарест 1975, стр. 24.

11.   УПЛлАЫТТЕУА V., О. ВООЩ АЛ О УЗК1, М. ВАКВ1ЕК, М. СОНЛЕТ, Р. ЬАУ1Е — Зог

1’1зо1етеп{ е( 1’1йегМ]1саИоп йе 1а 3, 5, 7 — МНуйтохуПаоопе (да1апд1пе) а раШт йе 1а ргороИз. Апп. 1пз1. Раз*еиг, 1963, 106, 4124, 292.

ПРОПОЛИС

А. КАИЯС .ФРАНЦИЯ

Всем пчеловодам известен прополис — второстепенный продукт улья. Прополис является скорее помехой, так как им пчёлы склеивают между собой все более или менее подвижные части своего жилища и замазывают отверстия или укрепляют те части улья которые им кажутся неустойчивыми.

Название этого продукта происходит от двух терминов (латин­ского и греческого) а именно: «про» — спереди и «полис» — крепость, город.

В областях с жарким климатом, а также для защиты своего гнезда от различных врагов, пчелы строят за летком настоящие барьеры, укрепления предназначенные для сужения прохода, что, в свою очередь, разрешает лучше его контролировать.

Прополис используется пчелами также для склеивания между собой подвижных рамок (что мешает работе пчеловода), а также для лакировки внутренних стенок улья.

Прополис имеет двоякое происхождение.

1.  Внутреннее происхождение. Как указывают немецкие иссле­дователи КЮСТЕНМАХЕР и ФИЛИПП,. ВЕК и др., прополис явля­ется смолистым остатком от первой фазы переваривания пыльцы.

Все ячейки, и в особенности вновь построенные, предварительно «промыты» этим внутренним прополисом до откладки в них маткой яиц. Это вытекает из опытов д-ра БРУННИНГА.

Согласно высказанному предложению, производимый пчелами прополис имеет пыльцевое происхождение. При помощи микроскопа это легко установить благодаря зернам пыльцы, содержащимся в про­полисе.

2.  Внешнее происхождение прополиса. Прежде не было мнения о внутреннем происхождении прополиса и полагали, что пчелы-сбор­щицы собирают его исключительно с почек деревьев, в особенности с почек тополя и ольхи, а также, несомненно, и с других деревьев, так как там, где нет ни тополей ни ольхи, прополис все-таки скапли­вается в ульях. Правда, прополис может быть и внутреннего проис­хождения, но всем практикам хорошо известно, что в расположенных в лесах ульях пчелы прополисуют больше чем в расположенных в поле ульях.

Состав: Так как прополис не является определенным веществом, у него не может быть химической формулы. Как доказал автор этих строк в сообщении, представленном профессором БУВЬЕ 26 ноября 1923 года в Парижской академии наук, прополис не бальзам а смола, состоящая из множества различных веществ, которые могут быть вы­делены методом растворителей. Самая интересная из существующих по этому вопросу работ — «Исследование канадского прополиса» — опубликованная в канадском журнале «Канэдиен Кемистри* химиком М. Т. П. ГЛЕДСТОН ШОУ. Подробное рассмотрение этого инте­ресного и кропотливого труда выходит за рамки настоящей статьи, но необходимо все-таки цитировать его в литературе.

Естественные соты содержат прополис

Как было указано, прополис— это своего рода цемент, исполь­зуемый пчелами для скрепления разных частей улья, но что еще более удивительно, что они используют его также для укрепления естествен­ных сотов, добавляя его к воску.

Долгое время полагали, что эти соты состоят из чистого воска. В действительности это не так: соты содержат не только воск, но и прополис и пыльцу. Мы уточнили эту точку зрения в сообщении пред­ставленном Сельскохозяйственной академии профессором ВЕЙССИЕ- РОМ из Музея естественной истории 3 мая 1944 года.

Естественные соты содержат приблизительно: 90—95% чистого воска ; 5—10% прополиса, добавленного в момент построения сотов; пыльцевые зерна в довольно значительном количестве, которые могут происходить из прополиса, содержащего всегда пыльцу, независимо от своего происхождения.

Сбор: Прополис может быть собран лишь соскабливанием со стенок улья при восстановлении или замене материала. Рекоменду­ется производить эту работу при довольно низкой температуре, так как в таких условиях прополис становится рассыпчатым и легче отделяется от основы.

Количество прополиса в улье зависит от разных условий. Одним из них является порода пчел. Некоторые породы пчел прополисуют много, другие меньше. Также имеет значение расположение улья. В среднем можно рассчитывать на сбор от 100 до 300 г с улья.

Применение. Обычно прополис не используется большинством пчеловодов. По моему мнению, они неправы, так как из него можно извлекать простым плавлением специальный воск, который ПЕРРЕ- МЭЗОННЭВ назвал прополисным воском. Этот прополисовый воск тягучий, мягкий и может заменять канифоль, замазку, глину и т.д.

Растворенный в горячем спирте, прополис является отличным защитным лаком для ульев или всех используемых в лаборатории металлических инструментов, предохраняя их от ржавчины.

Наконец, прополис использовался с давних времен в медицине, в особенности во время войны буров в конце прошлого века. Повязки с прополисом, наложенные на раны, предупреждали гангрену. Док­тора ПАРВЕЛ и МЕЙЕР очень хвалили этот продукт в медицинских журналах после испытания в лазаретах.

Эти хорошие результаты были получены благодаря антисепти­ческим и регенерирующим свойствам прополиса.

Автор получил недавно патент на применение обработанного прополиса для производства кремов и других косметических изделий.

Прополис как медикамент. А. САВИНА и Ф. Т. РОМАНОВ (отделение патофизиологии, Казанский ветеринарный институт) пред­ложили мазь, которая применяется при лечении порезов, нарывов, гнойных ран у животных. Мазь изготовляют из 100 г вазелина или животного жира, доведенного до кипения и охлажденного затем до 50—60°, к которому прибавляют 10 г прополиса, вновь нагревают до 70—80° и взбалтывают в течение 8—10 минут. Полученную смесь фильтруют в чистый сосуд и плотно закрывают. Смесь готова к упо­треблению сейчас же после охлаждения.

Мазь была также использована в медицине для лечения наруж­ных ранений и ожогов. Прополис»применяется и в стоматологии в виде 2 и 4%-ного раствора. (Из журнала «Би Уорлд», статья вос­произведена журналом «Абей де Франс», в переводе Ж. Хеке).

Был пущен в продажу пластырь на основе прополиса (примоч­ка), дающий отличные результаты при удалении мозолей и т.д. Этот пластырь уничтожает и бородавки.

Прополис и Страдивариус. В португальском пчеловодном жур­нале «Ас абельяс» напечатана статья, в которой Эрик КНОПФ (Раублинг, офф. Лудвигплац; ФРГ), изучавший свойства прополиса различного происхождения, рассказывает также о применении пропо­лиса для изготовления лаков для скрипок. Этот 'врач уверен, что скрипки, сконструированные знаменитым Страдивариусом, обрели свои исключительные качества благодаря прополису, собранному пчелами в области Кремона.

Дерматоз пчеловодов. Аллергия еще мало изученное явление, и при том очень неприятное. Аллергия может появиться к определенным пищевым продуктам, духам, пыльце, солнцу и т.д. Симптомы ее раз­личны, хотя главным образом она проявляется на коже и на сли­зистых оболочках. У некоторых пчеловодов появляется аллергия к прополису. Определенное число практиков страдают дерматозом пче­ловодов.

На первый взгляд, это заболевание подобно экземе — появля­ются зуд и покраснение, кожа высыхает и трескается в течение не­скольких дней. Состояние может ухудшиться. Поражаются участки — главным образом на руках — запачканные прополисом, на лице или голове, если пчеловод по неосторожности потер их руками. В этом случае следует избегать соприкосновения с прополисом, но этого трудно добиться при работе в улье.

При аллергии к прополису обычно назначают гоменольное масло и другие средства, которые однако мало эффективны.

Действенное средство было найдено ереванским врачом, который предложил смесь из двух частей аммиака я 8 частей глицерина. После тщательного мытья рук водой и мылом (для окончательного устра­нения прополиса) их натирают указанной смесью. Известно, что аммиак растворяет прополис и окрашивает кожу в желтый цвет. Затем руки споласкивают.

Этот способ описан в «Журнал сюисс д’апикултюр» от декабря 1958 г.

ИЗ ИСТОРИИ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОПОЛИСА

3. А. МАКАШВИЛИ СССР

Лечебные свойства прополиса были известны людям с древней- щих времен. Особенно хорошо были знакомы с прополисом в Древнем Египте. Следует полагать, что в Египте за несколько тысячелетий до нашей эры прополис был хорошо известен жрецам, в чьих руках были сосредоточены медицина, химия и искусство мумифицировать трупы.

О том, что с прополисом были знакомы древние греки, красно­речиво говорит само греческое название этого продукта.

Существует одно античное свидетельство, намекающее на про­полис. Прославленный греческий философ Аристотель, желая ближе изучить работу пчел, сделал для этого прозрачный улей. Однако пчелы не захотели выдавать своих «секретов» и замазали прозрачную внутреннюю стенку улья каким-то темным веществом, вероятно про­полисом (книга Г. Рансома «Священная пчела»).

Происхождение прополиса было предметом полемики между двумя римскими писателями — Плинием и Диоскоридом. Первый считал, что пчелы собирают прополис со смолистых выделений почек ив, тополей, канского каштана и других растений, а второй утверж­дал, что они собирают его со стиракса.

В дальнейшем сведения о прополисе появляются в сочинениях Галена и Варрона.

Абу Али Ибн Сина (Авиценна) в известном сочинении «Канон врачебной науки» различает два вида воска чистый и черный. «Чистый воск — это стенки сотов, в которые пчелы откладывают яички и где они выводят молодняк и хранят мед, а черный воск — это грязь ульев».

Понятно, что «черный воск» это прополис, который, по свиде­тельству Авиценны, «имеет свойство вытягивать концы стрел и шипы, он разрежает, слегка очищает и сильно мягчит». В другом месте он пишет, что «черный воск вследствие своего сильного запаха заставляет чихать».

Прополис наряду с другими продуктами пчеловодства часто упо­минается в грузинских лечебных книгах XII—XV веков. Вот выдержка из грузинской лечебной книги «Карабадини» (автор Заза Фанаскер- тели—Цицишвили), где предлагается средство от воспаления полости рта и порчи зубов, изготовляемое следующим образом : «Возьми про­полис, добавь немного мышьяка, красной чечевицы, тысячелистника, дубровника, затем все это растолки и просей. Потом возьми ложку оливкового масла и ложку меда. Размешай все и положи на боль­ной зуб».

Интересно также отметить, что грузинский лексикограф XVII в. Сулхан-Саба Орбелиани (1658—1725) в своем толковом словаре дает объяснение, что «прополис — это подобие воска на дне улья».

В грузинской народной медицине при некоторых заболеваниях применялись прополисные мази. Существовал обычай класть пропо- лисовую лепешку на пупок новорожденного, а также протирать про­полисом детские игрушки.

Такая популярность прополиса объясняется не только наблюда­тельностью народных лекарей, но и тем, что пчеловоды собирали его в большом количестве, так как грузинские пчелы сильно прополисуют стенки улья, рамки и потолочины.

В одном грузинском народном лечебнике XVIII в., найденном нами, рекомендуется применять прополис при кровохаркании. «Возьми прополисовые зернышки величиной с булавочную головку и в тече­ние трех дней глотай по три штуки утром и вечером».

За последние годы специальная экспедиция по изучению грузин­ской народной медицины выяснила, что лечебные свойства прополиса используются народной медициной и в настоящее время. Эти знания передавались устно из поколения в поколение и часто держались в секрете.

Вот некоторые народные рецепты.

Разогретая лепешка из прополиса прикладывается к больному месту при простудных болях.

При ревматических болях в области конечностей на больное место накладывается разогретая лепешка прополиса и перевязывается теплым на всю ночь.

При фурункулезах тонкая лепешка разогретого прополиса накла­дывается на прыщ и из него через некоторое время начинает выде­ляться гной. Возможно, требуется повторение этой процедуры.

17

2 — Прополис

Чтобы избавиться от мозолей, надо раопарить ноги в теплой воде, затем наложить на мозоль теплый дрополис в виде тонкой пластинки и перевязать.

О ПРОПОЛИСЕ. ЕГО УПОТРЕБЛЕНИЯ В УЛЬЕ

Г. Д. МОРС АНГЛИЯ

Люди обладающие слишком скудными сведениями о пчелах ас­социируют их почти исключительно с производством меда. Но пчело­воды знают что «роме нектара пчелы собирают еще пыльцу, воду и прополис.

Почвидимому прополис последний из упомянутых 4 продуктов, с которыми знакомится пчеловод. Он часто обнаруживает его суще^: ствование когда работая в улье замечает что на руках или на ста­меске собирается очень липкое вещество. Обычно это вещество жел­товатого или буро-рыжеватого цвета и сильно прилипает к коже. Для того чтобы отторгнуть его пчеловод констатирует что нужно восполь­зоваться каким-либо растворителем. С этой целью он использует спирт. Бензин или терпентин являются также действенными.

Начинающие пчеловоды прежде всего себя спрашивают почему некоторые детали внутри улья так сильно слипаются между собой. Они часто удивляются, что рамки так прилипают одна к другой и к улью, что следует их отделять с большой осторожностью, чтобы не сломать их. Позднее, когда начинающий пасечник принимается чистить различные детали улья, на него производит большое впечатление относительно большое количество этого вещества, о котором он узнает что это прополис. Он обнаруживает прополис в трещинах, на кромках, в отверстиях и даже на плоских поверхностях, которые, казалось бы, не нуждаются в подкладке из такого материала. Обычно пчелы не используют прополис чтоб замазывать отверстия больше 3—16 инчей, но употребляют его с целью сокращения размеров летка.

Для чего пчелы собирают прополис ?

Прополис может быть использован в пяти целях. В первую оче­редь он используется для замазывания трещин занимаемого пчелами помещения. Во-вторых, в областях с холодным климатом, прополис используется пчелами для сокращения летка. Третьей целью сбора прополиса является образование запасов на случай критических об­стоятельств как, например, необходимости скомбинировать его с вос­ком для того чтобы забальзамировать попавшее в улей и умерщвлен­ное в нем животное и изолировать его как в саркофаге если оно слиш­ком большое и тяжелое чтоб его выбросить. Пчеловоды часто находят таковых (мышей или ящериц) в ульях.

Прополис используется и с четвертой целью, а именно для при­крепления вертикальных сотов к основанию потолочной дошечки. Обычно пчелы укрепляют эти соты используя тот же материал из которого строят их. На наблюдательном улье можно проследить за тем как пчелы сгрызают материал связывающий соты с потолочной до­щечкой, заменяя его новым веществом, состоящим из смеси воска и прополиса или накладывают прополис поверх воска в области связи.

Пчелы используют также прополис и с пятой целью — и самой важной — для покрытия новых сотов, включительно и внутреннюю часть ячеек, тонкой пленкой из этого вещества. Исследователи пола­гают что используемый для наложения этого слоя прополис возможно состоит из вещества несколько различающегося от обыкновенного смо­листого материала обычно собранного с почек растений и немного измененного добавлением выделенных железами пчел энзимов.

Слой поблескивающего материала накладываемого пчелами на новые соты и на стенки ячеек а также на довольно большую часть внутренней стороны улья помещающего пчелиное гнездо был назван П. У. ФИЛЛИПОМ (1928 г.) «бальзамом». Некоторые исследователи полагают что при изготовлении этого «бальзама» пчелы используют пыльцу как главный источник материала. По-видимому необходимы дополнительные исследования по этому типу прополиса.

Откуда собирают пчелы прополис ?

Когда сбор нектара обильный, пчелы посвящают гораздо меньше времени и усилий сбору прополиса. Производителям меда в сотах известно что в разгаре сезона сбора мало сечений сплошь покрыты прополисом. Позже, к концу сбора желтое и липкое вещество начи­нает мешать подготовке меда в сотах для продажи.

Иногда прополис собирают в начале сезона, но его массивный сбор начинается к концу сбора нектара и к приближению осени.

Пчелы-сборщицы, специализированные в сборе прополиса раз­вертывают свою деятельность с этой целью в более теплые часы дня, нормально от 10 часов утра до половины четвертого после полудня. Они поступают так потому что поверхности с которых они собирают прополис обычно слишком твердые для их эксплуатации в другие часы. Холодный прополис делается очень твердым и крохким. И все же при температуре сверх 70°Ф он становится очень мягким, а при приблизительно 150°Ф расплавляется.

Как собирают пчелы прополис ?

Пчелы находят источники прополиса на листьях, почках и коре хвойных, тополей, слив а также других растений выделяющих смо­листые вещества.

Происходящий из смол хвойных прополис светлого цвета. Про­полис с тополей красноватого цвета. В опубликованной в Южноафри­канском пчеловодном журнале от 1968 г. статье сообщается что наблю­дались пчелы собирающие алюминиевую краску которую использо­вали в гнезде устроенном в дупле старого дуба. У пчел этой семьи было замечено что их корзиночки с пыльцой содержали алюминиевую краску (еще очень жидкую).

Многие из исследователей которые проследили за деятельностью пчел в сборе пыльцы детально наблюдали за их способом работы.

Одним из таковых является Вальтрауд МЕЙЕР чьи работы были опу­бликованы в журнале Бии Уорлд (1956 г.).

Воспользовавшись усиками для того чтобы обнаружить самую подходящую частицу, сборщица прополиса приступает к захвату про- полисной частицы челюстями. Затем, с поднятой головой, она отсту­пает до тех пор пока схваченная ею частица прополиса растягивается на подобие длинной нитки и в конце концов разрывается. После этого она ножками маневрирует смолистую частицу и откладывает ее в одну из своих корзинок для пыльцы.

Все следящие за этими движениями поражены искусностью с которой пчела маневрирует этот липкий материал без того чтобы выпачкаться. Ясно что пчела выделяет определенное вещество, кото­рое помогает ей выйти из создавшегося положения.

Время необходимое сборщице для сбора однотранспортного груза очень варьирует в зависимости от вида и состава материала а также от ловкости с которой пчела нагружается. МЕЙЕР заметил что сбор­щицы прополиса часто прерывали действие загрузки возвращаясь к гнезду а затем обратно к месту сбора, к тому же без того чтобы груз уменьшился. Можно предположить что целью этих полетов было потребление пищи.

Известно что обычно сборщицы пыльцы опустошают по ячейке с медом прежде чем пуститься в полет для сбора. Несомненно поло­жение отличается от положения сборщицы прополиса так как первая нуждается в меньшем количестве меда для смешения с собираемой сырой пыльцой; но обе категории сборщиц нуждаются в пище и не могут найти ее в прополисе.

Полеты сборщиц прополиса к гнезду и назад продолжаются в среднем в течение 15—20 минут. Эти полеты для перерыва имеют место при интервалах от 5 минут до одного часа.

Что происходит после возвращения сборщицы прополиса

в гнездо ?

Иногда сборщицу прополиса встречают у летка другие рабочие пчелы с прополисом и помогают ей разгрузить свою обножку. Но обычно она проникает в гнездо до того места где используется про­полис. Там спокойно ждет пока другая рабочая пчела работающая с прополисом и нуждающаяся в материале подходит к ней и перени­мает у нее часть груза. Изредка сборщица может сама избавиться от груза. Разгрузка ее другими пчелами может продолжаться от одного до нескольких часов. Если собранный материал недостаточно мягок то сборщице приходится иногда ждать и до следующего дня чтобы ее освободили от груза. В таком случае она иногда подходит к летку в ожидании пока груз размягчается, под воздействием солнечного тепла, и может быть удален.

Какие пчелы собирают прополис ?

Сбор прополиса является по-видомому уделом небольшого коли­чества рабочих пчел. Из всего населения пчелиной семьи лишь не­сколько пчел вовлечены в эту деятельность и лишь изредка выполняют и другие работы, как например сбор нектара, даже если это не­обходимо.

Но сборщиц прополиса можно заставить покинуть эту работу и перейти к сбору нектара если поблизости источника прополиса суще­ствуют источники нектара с высоким содержимым сахара и с притя­гивающими ароматными свойствами; но обычно они скоро возвраща­ются к сбору прополиса.

Возраст сборщиц прополиса редко ниже 15 дней, как и других сборщиц. Сборщицы также вовлечены в деятельность цементирова­ния внутри улья. Они могут это делать тем более что работа по цементированию производится обычно поздно после полудня, по окон­чании сборной деятельности.

МЕЙЕР констатировал что вовлеченные в цементировочный труд до^л,ц_иМОжно отнести к двум группам; группа особей выполняющих КрК^ща^ло эту работу и другая, состоящая из «случайных работ- группе состоят особи в ту пору не имеющие спе- ВДЙД&ЙЙЙ! связанностей в улье, являясь таким образом свободными дд#_)а^едд^чёция в какую-либо работу, причем необходимость в этом им сообщают определенным образом или им становится известно об етрм. непосредственно, наблюдением. Было установлено что пчелы ЬррювЬЖщне,. цементировочную работу имеют возраст сборщиц. у^ыдн^бМ«н'|_чу5аствуют в других ульевых работах даже если есть необходимость • йЬмочь. Часто эти пчелы смешивают воск с прополи- _т.  отсутствует, на его месте могут иопользо-

1онтд.г«гэ ' югавдод дохп

В'ТЙРсйбйМо мё^ОДов устранения склонности к прополисованию

•ЫНЗДНЗ,

Деревянные изделия употребляемые как пасечный инвентарь обыкновенно выходят $ад_Р,фд$рики хорошо отстроганными для того чтобы поступить в продажу как законченные изделия наилучшего ЙЧёсгё&Е^Э1НаК^и#0рбЩР !'бТ1ШяЧ|рй|1ййнбМ^й дереве пчелы откладывают Эйёпер®ШТШВнё^иЫеШ(ё“собрать прополис введе­нием нестроганной доски в улей. Пчеловодам вообще известно что

пропсшиеа* шхадитоя обычно на нестрогая- НВДОДОМОХМДОФЯХ. мниооиа " <«змЭ .иэоа мэг

-!цП РЙШ^а.ядШ Тгр#Д#гИ^Щ%йШ^мИрбШйиОЩИнйй некоторых из вну- т$ённ№х 1йёт!ёйЧ^Д'йД^зтих-^г1й&жй§^тйёйрВ1тй^!Ир&скёй^г‘йли 'Йёрафййрм. На­пример, иные пчеловоды красят переднюю половину верхней ййоверх- й&ет#1да.8 ул&йРф! йократ^' внутреннюю пшерхноеть’^вя* рн «власти шзюв.з|Томра<жавэт»1хсдвух5р|ш «ошожноои не дриходитш по;вкусу гйй**1М даттаки».1обрашйО;сойращаетйЯ2«рОйоаисование а также я И«й^ЮЩе№»ЛЩНйе1Шремей»фф€- зж тот тнхояьноф-.             к я-.щ.

®¹’'^кн'^:Жр*ё'фЖ«рШШиё^):сё%ёйй^!й дерёй1^яйс1Йлй^ё^;?ё^'Ряа^:-йУыЫ^;:,6бЬаз'ЬЫ

фшжвтт шщ*¹ Почти

Нё1оМёМсЩ^:!^ё^1н'Й%ё^е нёкб^рйё ШМ^сйроРШйШ"^'ё°Йов1й^я'^;сё^ёНШ1 ОДнЯШ$ Я<«уйШЧЙ6^ёлуШкУ^!Ш№1Ж«6Т^ДТароВД.'^ЩтДД^я'кО'^Ый обычно покр|явал; парафиномторамкик Применение этом- вещества йа некоторых част5гжг.(надртавишн®л сшеншив>;в. тла'ВйшлА0бразом!2 *ю>гее дне по-видимому не слишком беспокоит пчел. Если это так то не понимаю почему бы нам не использовать парафин на верхних план­ках и концах рамок в улье.

Обладает ли прополис противобактерийными свойствами?

Еще в древности полагали что прополис обладает кое-какой излечивающей ценностью в лечении контузий и рая с нагноением, а врачи его применяли в припарках. Некоторые специалисты рекомен­дуют его как домашнее средство для лечения ран и ожогов.

Недавно в Польше и СССР, были произведены опыты, которые по-видимому доказывают что прополис обладает некоторыми проти­вобактерийными свойствами. Сырой материал собираемый рабочими пчелами по-видимому подвергается превращению выделяемыми пче­лой энзимами. Качество прополиса предназначаемого для медицинских целей несомненно в зависимости от источника так как некоторые об­разцы обладают более сильным эффектом чем другие. На основании произведенного в СССР опыта пришли к заключению что продолжи­тельное складирование не сокращает ни содержимого в химических составных ни их противобактерийного действия.

Тот факт что небольшое мертвое животное может быть с успе­хом изолировано внутри улья при помощи прополиса показывает что это вещество обладает определенными противобактерийными свой­ствами.

В журнале Глинингс ин Бии Калчер в 1955 г. сообщалось что Альбин ИЕНКО из Австрии патентовал способ добавки спиртной вытяжки прополиса в зубные пасты и полоскания. Таким образом антисептические свойства этих препаратов усилены.

Необходимость получать воск без прополиса

Воск, который используется либо для изготовления свечей либо искусственной вощины поскольку возможно, не . должен содержать прополиса. ,

Главная причина этого состоит в том что прополис плавится при меньшей температуре чем воск. Смесь с высоким процентомпропо­лиса в воске расплавляется при температуре между 90 и 10СТД. При­близительно 10% этой смеси плавится при температурах от 60° ДО 70°Ц.

Искусственная вощина содержащая большой процент прополиса проявляет склонность к плавлению и сгибанию гораздо быстрее чем это происходит е относительно чистым воском. Присутствие пропо­лиса, в свечах производит тот же эффект г, среди других свечей они сгибаются. Но невыгоды в связи с использованием искусственной вощины столь же значительны. Многие пчеловоды поставляют фабри­кантам воск, получая его обратно от них_:;В, виде искусственной во- щины- Эти пчеловоды получают уверения , что фабриканты будут ис­пользовать лишь поставленный ими :восил а; также и сам»: стараются чтобы последний содержал как (можно 'меньше прополиса.                            ,т> и

Несомненно что не существует на 100% чистого воска так как невозможно произвести совершенное фильтрование. Активированный уголь более всего показан как среда для фильтрования. Никакой воск, за исключением по-видимому новой искусственной вощины лишь 2— 3 дня как введенной в гнездо, не лишен прополиса, материала кото­рым пчелы полируют соты и укрепляют их (а возможно это служит, и противобактерийным средством).

Но воск содержащий в самой большой пропорции прополис получается вследствие смешивания соскребанного с деталей улья воска и в особенности с рамок с сотами и забрусом.

Успех пчеловода не идет далее сотов с расплодом. Соты которые сгибаются содержат меньше ячеек для вывода рабочих пчел.

Склонность к прополисованию у некоторых пород пчел

Исследователи изучавшие пчелы Аргз тдхса, Аргз Цогеа и Аргз йогзаЬа утверждают что эти пчелы не используют прополис. То же самое наблюдается и у африканских пчел.

В своей работе озаглавленной «В поисках самых лучших пчели­ных линий; заключительные путешествия»- монах АДАМ из Мо­настыря Святой Мэри, Бакфэст, Южный Девон, Англия, показывает что некоторые пчелы, в особенности пчелы из Малой Азии проявляют склонность к очень выраженному прополисованию.

Он сообщает сперва о желтой пчеле часто встречаемой в области расположенной между Атласскими горами и пустыней Сахары, изве­стная под названием закапегшз. Он предполагает что эта пчела была ввезена из Среднего Востока эмигрирующими евреями. АДАМ утвер­ждает что эта пчела отличается больше коричнево-рыжеватым цветом чем желтым и проявляет явную склонность к прополисованию.

Автор говорит затем о местной пчеле из Центральной Анатолии, Малая Азия, где зимы очень суровые. Эта пчела А. теТЩега уаг. апаШка полностью использует прополис так же как и пчелы которые защищают себя от суровых зим. АДАМ говорил : нельзя сказать что в Египте пчелы не прополисуют. В Фаюме где выращивают итальян­ских пчел я наблюдал внутреннюю часть ульев обложенную самым смолистым прополисом. Он утверждает что в течение своих исследо­ваний для установления наилучших линий пчел он прошел 82 000 миль на суше, 7 792 мили по морю и 4 760 миль самолетом.

Большинство из нас знаем по опыту что серая кавказская пчела проявляет более сильную склонность к прополисованию чем итальянская.

Некоторые соображения относительно прополисования

Использование прополиса пчелами — привычка от которой они не так скоро откажутся, хотя многие пчеловоды полагают что это совершенно ненужное дело в современном улье. Несомненно использо­вание этого материала .пчелами в обеспеченных им людьми «жили­щах» с соответствующим инвентарем менее необходимо в настоящее время чем тогда когда они пребывали в диком состоянии. Но по-

видимому мы не можем утверждать то же самое по отношению к пленке прополиса натянутой пчелами на сотах и на стенках ячеек.

Во времена Аристотеля прополис назывался «слезами деревьев» — таких пород как акация и вяз.

Во времена Вергилия прополис был известен как вещество используемое пчелами для построения навесов над летком. Его цена была больше цены меда.

ЛАНГСТРОТ докладывает что во многих странах, включая Ита­лию, прополис чрезвычайно ценился как лак. Его растворением в спирте и фильтрованием получали тонкий лак для дерева, а скомби­нированный с другими элементами его употребляли как средство для прокуривания коридоров и жилых комнат.

Тот же автор отмечает что раньше или позже пчелы замазывают все отдушины через которые они могут пролезть. Так, вентиляционные отверстия покрытые проволочной сеткой почти всегда закрыты про­полисом. Я лично констатировал что то же самое происходит с про­волочной сеткой прикрепленной к приспособлениям для изгнания пчел из под потолочной дощечки улья, через которую тепло должно было циркулировать от основной, более сильной семьи к верхним нуклеусам.

Утверждают что Аргз Догеа, маленькая пчела из юго-востока Азии строит соты на конце ветки, покрывая частично последнюю очень плотным и липким прополисом с целью защиты сотов от муравьев.

Говорят что существуют на земле области покрытые лесами из деревьев выделяющих так много смол что практикование пчеловод­ства невозможно из-за избыточного прополисования которому эти леса благоприятствуют.

ЛИТЕРАТУРА

1.  ВКОТНЕВ АИАМ. — 1п ЗеагсЬ о1 1Ье Вез* 81га1пз <Л Вее. СопсШсНпв .Гоцтеуз. вее

1УОГШ 45 : 70—13, 104—111, 1904

2.  ЕВ\УШ с. АЬГОМЗТ18 — Зоте Зоигсез о1 РгороНв. СНеапз. 1п вее Си1. 01 : 02—3, 1033

3.  С. С. ВЦТХЛК — ТЬе НопеуЬее. Ох1огй ТШуегаиу Ргевз. ЬопОоп, 1040

4.  в. В17УЗ — Рговгезз1уе Веез Ше А1ит1Шшп Ра1пе 1п РгороНгЬт* I ЗоиШ А1г1сап вее

Зоита1, 40 : 2—4 1900

5.  1.А17С5ТВОТН Ь. Ь. — Шуе апй Нопеу Вее. ТЬе АтеПсап вее Дт. НатШоп. III, 1923

6.  МАЬСОМ ГНАЗЕК Н. — Веекеер1п8' 1п АпОДиНу — ЧШу. о1 ЬопЙоп Ргезв. ЬопЬоп, 1931

7.  М7АЬТВАШ> МЕУЕВ — „Ргоро11з Веез“ алй 1Ье1г АсНуШез. Вее МГогМ 37 : 20—30, 1910

0. РШЫЛР5 Е. Р. — ВеекеерШв- ТЬе МастШап Со. N. У. 1993

9. В1ВВАМОЗ С. В. — ТЬе ВеЬау1оиг ап<1 6ос1а1 Ше о1 НопеуЬеез. Ооуег риЬНсаНопз 1пс. Ке\у Уогк, 1904

10. 5СНЕ1ХЕВ 3. О. ; Е. ВОСАЬА ; ЗТА81АК апй Н. 211ВЕК — АпШ>ас1ет1а1 РгореШез О* РгороЦз, Г. В. 1Уе113 (СЬет. АЪз№. 71 : 99207 I 1909).

ИССЛЕДОВАНИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ
ПРОПОЛИСА

ФАНГ ЧУ КНР

1.   Тесты по микостатическому действию прополиса

От 1957 до 1959 гг. мы лечили прополисом китайского происхож­дения кожные заболевания — мозолей и др. Во время лечения мы установили также вылечивание грибковых заражений кожи ног.

Чтобы проверить, объясняется ли выздоровление антимикотическим воздействием прополиса мы испытали в 1975 году микостатическое действие прополиса. Мы работали со следующими видами: 11 видов поверхностных грибков — АсНоггоп всЧгопШт, ЕргйегторНуЬоп {1оссо- вит, Мгсгозрогит $еггидгпеит, М. дурвеит, М. 1аповит, ТпсНоркуЬоп сегеЪп}оггпае, Т. сопсепЫсит, Т. дурвеит, Т. гиЪгит, Г. Ьопзигат и Т. ьгоЫсеит; 9 видов глубоких грибков — АврегдШив {итядаЬив, А. пгдег, СапсМа а1Ысапв, СгурЬососсиз пео]огтапз, СеоЬггсЪит сапсН- йит, Ногтойепйгит сотрасШт, Н. рейговог, РНййорТгога иеггисова и 8рого1ггсНит зскепскИ.

В результате применения метода кружков фильтровальной бумаги мы установили, что бумага, пропитанная спиртовой или эфир­ной вытяжкой с 1—10% прополиса, которую затем высушивают, ока­зывает микостатический эффект на ©се 11 видов поверхностных гриб­ков, более слабый — на ТпсНорКуЬоп сопсепЬггсит. На 9 видов гриб­ков вытяжки оказывали более слабое воздействие или совсем не ока­зывали его. Разницы между воздействием спиртовых и эфирных вытя­жек не установили. Автор считает, что микостатические компоненты прополиса — флавоны и производные коричной кислоты.

2.    Применение прополиса перорально при псориазе

С ноября 1974 года по декабрь 1976 года автор испытал лечение прополисом при 160 случаях псориаза обыкновенного. Использовали таблетки, содержащие по 0,3 г прополиса ; давали по 2—3 таблетки

3    раза в день. Лечение продолжалось от двух до трех месяцев. Дру­гой одновременной терапии не применяли. Эффект прополиса проя­влялся 2—4 недели после начала лечения, а выздоровление в боль­шинстве случаев устанавливали 2 месяца спустя. Для 37 случаев доби­лись клинического выздоровления, для 17 — значительного улучшения состояния, для 58 — улучшения, а для 48 случаев прополис оказался неэффективным. По всей вероятности терапевтический эффект пропо­лиса при псориазе зависит от продолжительности болезни. Он более эффективен в начальных стадиях. Из 34 случаев давностью один год, 22 (64,71%) добились клинического выздоровления, в то время, как для 23 случаев с продолжительностью болезни более 20 лет добились клинического выздоровления лишь в одном случае (4,35%) (Р<0,01). Из 73 случаев с продолжительностью болезни менее пяти лет, для 33 (45,21%) добились клинического выздоровления, в то время, как из 87 случаев с продолжительностью болезни более пяти лет только для

4    (4,59%) добились клинического выздоровления (Р<0,01). Из 37 случаев, для которых добились клинического выздоровления и кото­рые держали под наблюдением в течение 1—2 лет после лечения, в пяти случаях появился рецидив через три месяца, в семи — через семь-девять месяцев, а в четырех — через десять-двенадцать меся­цев, в одном случае — через один год. У 15 случаев не наблю­дали рецидива даже год спустя. Пока нет специфического лечения для псориаза; но результаты данных исследований указывают на определенные эффекты прополиса, применяемого перорально. Более того, пероральное применение более удобно, чем топическое, а пропо­лис не вызывает токсических побочных эффектов, подобно лечению химическими средствами. Во время вышеупомянутого лечения только у нескольких больных появлялись побочные эффекты в легкой форме — сухость ротовой и носовой слизистых оболочек, головокружения, эпигастральные нарушения и сонливость. Но эти побочные явления лечению не мешали.

3.    Клинические наблюдения в связи с лечением прополисом гиперлипидемии

Во время лечения прополисом псориаза автор установил пони­жение уровня липидов в крови. Провели наблюдения над больными с повышенным давлением, атериосклерозом и коронарным заболева­нием, осложненными повышенным уровнем сывороточных липидов. Взяли под наблюдение случаи с более 230 мг% холестерола в сыво­ротке или с более 120 мг% триглицерида в сыворотке, то есть 45 больных, в том числе 19 мужчин и 26 женщин, возрастом от 24 до 76 лет, в среднем 54 лет. Всем больным давали три раза в день по 3 таблетки, содержащие по 0,3 г прополиса. Продолжение одного курса лечения — 1 месяц, иногда два месяца. Во время лечения из пищи не были полностью исключены липиды; данный курс лечения не был ассоциирован с другим курсом, за исключением случаев с повышенным давлением, когда применяли диализ с апитоксином. На­тощак определяли липиды через один и через два (месяца после на­чала курса леечния. Результаты «одержаны в таблице :

ЭФФЕКТ ПРОПОЛИСА, ПРИМЕНЯЕМОГО ОРАЛЬНО, НА УРОВЕНЬ ЛИПИДОВ СОДЕРЖАЩИХСЯ в КРОВИ Липиды Число В начале курса Через одномесячного курса лечения Через двухмесячного курса лечения слу­ чаев __ лечения хмг%±ЗЛ. хмг%±ЗЛ. среднее пони­ жение, мг% Р хмг%±ЗЛ. среднее пони­ жение, мг®/в Р холестерол трнгли- 23 265± 7,81 235±8,24 29,61 <0,01 228± 7,60 41,30 <0,01 церид 44 246± 18,52 192±4,29 53,88 <0,01 170± 11,09 76,67 <0,01

В случаях с повышенным уровнем липидов в крови, мы добились значительного понижения уровня холестерола и триглицерида при лечении прополисом в течение одного месяца или двух. В зависимости от типа липидов, содержащихся в крови, были отмечены следующие эффекты: (1) из 4 случаев, принадлежащих типу 11 а, в 3 случаях отмечено понижение уровня холестерола, а в одном нет. Из данных 3 случаев была достигнута нормальная величина в двух случаях. Отмечено также, что в случаях типа 11 а прополис не воздействовал на триглицерид. (2) Из 30 случаев типа 11 б уровень триглицерида был понижен в 27, причем в 11 случаях — до нормального уровня; в остальных 3 случаях не было отмечено понижения. Что касается 12 случаев типа 11 б с повышенным уровнем холестерола, прополис ока-; зался неэффективным в одном случае и эффективным в 11 случаях, причем в 6 из последних холестерол достиг нормального уровня. (3) На единственный случай типа III терапевтический эффект был удо­влетворительным. Об этом свидетельствует понижение уровня холес­терола и триглицерида от 410 мг% до 302 мг% и, соответственно, от 510 мг% до 440 мг%. (4) Что касается 10 случаев типа IV, после лечения уровень триглицерида понизился от 310—575 мг% до 120— 390 мг% во всех случаях. В 6 случаях типа IV с повышенным хо- лестеролом, лечение было неэффективным в одном случае, и эффек­тивным в 5, причем в 4 была достигнута нормальная величина уровня холестерола.

Что касается 6 больных, у которых уровень липидов был пони­жен до нормальной величины, их состояние было вновь проверено через 20—45 дней после лечения. Было отмечено, что липиды под­держивались на нормальном уровне. Это указывает на продолжение эффекта понижения уровня липидов в крови на короткий период после прекращения лечения прополисом.

У большинства больных, леченных прополисом симптомы исчезли или уменьшились. Электрокардиограммы указали определенное улуч­шение состояния у ряда больных. Вообще больные не- проявили аллер­гии к прополису. Только у нескольких больных появлялись побочные эффекты в легкой форме — сухость ротовой слизистой оболочки и эпигастральные нарушения. Хотя известно, что прополис содержит различные флаконы, необходимы исследования по определению актив­ных компонентов и механизма понижения гиперлипидемии и воздей­ствия прополиса при лечении больных с атериосклерозом и коронар­ным заболеванием.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОПОЛИСА В МЕДИЦИНЕ •

И. ЧИЖМАРИК

ЧЕХОСЛОВАКИЯ

В 1971 г. в Братиславе состоялся первый, а в 1976 г. второй международный симпозиум по прополису — пчелиному продукту, на­ходящемуся в центре внимания и исследований многих. научно-иссле­довательских институтов.

Оба симпозиума доказали, что кроме других областей челове­ческой деятельности прополис находит применение и в медицине.

Поэтому я хочу в своей статье заняться результатами современ­ных попыток использовать прополис в этой области, проанализиро­вать их пути и сравнить достигнутые результаты.

Медицина использует следующие биологические и фармакологи­ческие действия прополиса.

а), бактерицидное, б) бактериостатическое, в) местно анестези­рующее, г) противотоксическое, д) антивирусное, е) фунгицидное, з) антифлогистическое, ж) фунгистатическое, и) дерматопластическое.,

Этот широкий спектр биологических и фармакологических дей­ствий прополиса является следствием его разнообразного химического состава. В состав прополиса входят вещества группы ароматических альдегидов, ароматических кислот, алкогрлей, флавонов и флавоно- лов. Прополис содержит и вещества, находящиеся в воске и пыльце.

Медицина использовала и использует на практике и в исследо­вательских целях лечебное действие прополиса преимущественно в следующих лекарственных формах:

а)    растворы, содержащие прополис (экстракты) : это, главным образом, водные и спиртовые растворы различной концентрации;

б)    мази с прополисом, в которых в качестве мазевой основы ис­пользуются белый или желтый вазелин, ланолин, животный жир или растительные масла (подсолнечное, оливковое) и т.п.;

в)    пасты с прололисом, приготовленные путем растирания про­полиса с вазелиновым или иным не раздражающим маслом ;

г)    эмульсии из прополиса, приготовленные путем осаждения растворенного в винном спирте прополиса с водой или молоком ;

д) пластыри из прополиса, для лечения кожных заболеваний;

е) ингаляционная форма введения .прополиса ;

ж) биологические повязки;

з) жевательные резинки, леденцы, используемые главным обра­зом в стоматологии.

В медицине прополис применяется прежде всего в хирургии, в дерматологии, оториноларингологии, педиатрии и стоматологии.

Рассмотрим теперь вкратце некоторые осуществленные до сих пор эксперименты по использованию прополиса в медицине и тех областях, в которых лечение прополисом дало положительные результаты.

В.области хирургии прополис с успехом применяется для лече­ния трудно заживающих ран. При этом лечении прополисная мазь в концентрации 10—30% ускоряет грануляцию раны, снижает ощу­щение боли даже при сильном гноении или если края раны некро­тизированы. При последующем лечении прополисная мазь способ­ствует эпителизации раны. По сравнению с применением обычных мазей время лечения часто сокращается наполовину. Прополисная мазь оказала действие и на раны, зараженные бактериями, резистент­ными к применяемым до сих пор лекарствам.

Положительные клинические результаты были достигнуты и при лечении декубитов, трофических язв голени, которые раньше лечили безуспешно.

В последнее время значительно возросло применение прополиса и в дерматологии. Результаты проведенных опытов доказывают, что прополис можно употреблять в дерматологии для лечения :

—  хронического ограниченного невродермита (устойчивое, боль­шое ограниченное зудящее воспаление кожи),

—  хронического диффузного невродермита (устойчивое, рассеян­ное зудящее воспаление кожи),

—    острой экземы,

—    хронической экземы,

—    микробной экземы,

—    дерматомикозов (кожных грибковых заболеваний).

Прежде чем начать лечение этих кожных диагнозов, следует всегда сделать испытание на чувствительность больного к прополису. К больным с аллергией на прополис это средство применять нельзя.

В последнее время стало широко применяться лечение путем вдыхания прополиса. Этот способ лечения, при котором больной вды­хает аэрозоль прополиса, оказался надежным при лечении некоторых заболеваний дыхательных путей и, следовательно, он применяется главным образом в оториноларингологии. Анализ полученных до сих пор результатов свидетельствует о том, что прополис можно в этой области медицины употреблять для лечения : внезапно возникшего воспаления бронхов, острого воспаления слизистой носа, глотки и гортани, хронического воспаления бронхов, атрофического, хрониче­ского воспаления слизистой глотки.

Хорошие результаты при введении прополиса были достигнуты и при лечении гнойных воспалений среднего уха, где применяются тампоны, пропитанные спиртовым экстрактом прополиса. Прополис прекращает и вполне подавляет гнойный процесс и устраняет приз­наки воспалительной реакции.

В педиатрии испытывали действие прополиса главным образом для лечения грибковой инфекции ног, в частности, на внутренней и средней части стопы и между пальцами.

В стоматологии применяется, как правило, 2—4% спиртовой экстракт прополиса, который по мнению многих авторов обладает хорошим действием и его можно с успехом применять в следующих случаях :

—   лечение мягких тканей полости рта, лечение афт, грибковых заболеваний, язв и нарывов на деснах.

В последнее время успешно вводили прополис и для лечения по­вышенной чувствительности шейки зуба, при пародонтозах (точнее не определенных болезненных изменениях вокруг зуба),

—   для лечения десен при пародонтопатиях, ульцерозном гинги­вите (язвенном воспалении десен),

—   для лечения солитарных афт (единичных воспалений слизи­стой оболочки рта, проявляющихся образованием маленьких пузырь­ков). В случае солитарных афт установлено, что прополис действует лучше чем азотнокислый калий или хлористый цинк. В этом отноше­нии своим действием прополис может замещать и применяемое на практике йодное масло.

В терапевтической стоматологии можно, кроме того, применять прополис для местного обезболивания при повышенной чувствитель­ности твердой ткани зуба во время препарации кариеса зуба или для местного обезболивания при повышенной чувствительности болезнен­ных шеек зубов, клиновидных дефектов и абразий (при отшлифовке).

В хирургической стоматологии прополис применяется для ане­стезирования при шатающихся зубах, корнях, молочных зубах с при­даточными корнями и как оолеутоляющее средство после экстракции зуба. Он дал хорошие результаты и как антигеморрагическое сред­ство после экстракции.

Из приведенного краткого обзора видно, что прополис играет роль в гуманной медицине и как самостоятельно применяемое лекар­ственное средство и как дополнитель к уже применяемым веществам. Исследование по дальнейшему его применению и в других областях человеческой деятельности интенсивно продолжается во многих странах.

АНАЛИЗ И КРИТИКА ТЕОРИИ ОБ ОБРАЗОВАНИИ ПРОПОЛИСА

И. ЧИЖМАРИК, м. МАЧИЧКА, И. МАТЕЛ

ЧЕХОСЛОВАКИЯ

В прошлом прополис считали воском. Позже, в результате изу­чения жизни пчел установили, что прополис является строительным и защитным материалом, при помощи которого пчелы заклеивают разные трещины в улье и, что прополис обладает свойствами отли­чающимися от воска. Возник также вопрос как и из чего образуется прополис ?

Первые теории об образовании и происхождении прополиса были очень примитивными, и по мере накопления новых сведений о жизни пчел эти теории были отклонены. Сегодня их можно считать только ступенями по пути к современным теориям об образовании этого пче­линого продукта.

В настоящее время для объяснения образования и происхожде­ния прополиса в пчеловодной науке возникли две теории.

Одна из теорий утверждает, что пчелы собирают прополис из смол и выделений почек и с коры некоторых хвойных или лиственных пород деревьев, находящихся около точка пасеки. Сторонники этой теории утверждают, что пчелы собирают прополис следующим обра­зом : сначала пчела забирает при помощи мандибул кусочек смолы или выделения, который перерабатывает затем также при помощи движения мандибул. После этого пчела забирает прополис передними ножками, затем средними и, наконец, помещает его в корзиночку одной задней ножки. Таким образом пчела делает обножки, как и при сборе пыльцы. С эти^ грузом смолы пчела летит в улей, где другие пчелы забирают у нее обножку и используют там, где нужно. Основными сторонниками этой теории являются РЕШ, ЭВЕНИУС, БЕРЛЕПШ, ЧИЕЗЕЛЬСКИИ и др. Так как первый, кто разработал эту теорию, был РЕШ, она называется теорией РЁША об образова­нии и происхождении прополиса.

В 1907 г. появилась теория д-ра КЮСТЕНМАХЕРА, отличаю­щаяся от предыдущей; в ней объясняется образование и происхож­дение прополиса из пыльцевых зерен. По д-ру КЮСТЕНМАХЕРУ, рабочие пчелы глотают пыльцу и накапливают ее в одной из частей кишечника СЬ,у1из тадеп, которую д-р КЮСТЕНМАХЕР называет

«пыльцевым желудком». Собственный процесс образования прополиса, начинается с поглощения большого количества воды. Пыльцевые зер­на в результате поглощения количества воды, превышающего в пять раз их собственный вес, разбухают и лопаются. Из них вытекает плазма, которую пчелы используют для кормления молодых пчел- кормилиц расплода. Из оболочек пыльцевых зерен образуется баль­зам, который пчелы выделяют в виде 2—3 миллиметровых капель. По д-ру КЮСТЕНМАХЕРУ, этот бальзам и является основной составной частью прополиса.

Но не все пыльцевые зерна обладают одинаковыми свойствами, и Часть из них не лопается при разбухании, представляя таким обра­зом отход кормов, от которого пчелы стараются освободиться. Из-за меньшей удельной плотности этот отход — пыльца — доходит до задней части кишечника, где комбинируется с бальзамом. Извилисты­ми движениями «пыльцевого желудка» рабочие пчелы вытесняют и откладывают на стенки и в трещины улья непереваренную массу бальзама и пыльцевых зерен. Там образуется желтая или желто­красноватая масса. Перед полным затвердением пчелы добавляют к ней воск, пыль и даже механические примеси, таким образом этот материал приобретает такую консистенцию, которая ' позволяет пере­носить его с одного места на другое.

Следовательно, по д-ру КЮСТЕНМАХЕРУ, прополис образуется из бальзама, происходящего из внешних оболочек пыльцевых зерен, которые пчелы смешивают с воском и другими дополнительными ма­териалами, главным образом, материалами имеющими консистенцию пыли, и различными примесями. «Несмотря на внимательное наблю­дение, я не видел ни одной пчелы, которая собирала бы смолу с почек, и поэтому для меня этот вопрос является фантастическим», утверждает в заключение описания своих опытов этот немецкий иссле­дователь.

Как видим, теория КЮСТЕНМАХЕРА об образовании и проис­хождении прополиса совсем иная, чем теория РёША.

Все остальные мнения, высказанные до настоящего времени, об образовании и происхождении прополиса являются в принципе пере­работанными деталями первой или второй теорий. Но которая из этих двух теорий правильная ?

Исследования пчеловодной науки и прежде подтверждали или опровергали отдельные детали этих двух теорий. Поэтому возникла объективная необходимость их сопоставления и — на основе новых данных — критического анализа ; в результате следует попытаться разработать новую, более объективную теорию об образовании и происхождении прополиса.

Попытаемся обсудить хотя бы несколько аспектов этих двух теорий. За основу обсуждения и критического анализа можно взять результаты изучения химического состава прополиса, известного нам в настоящее время только частично.

Если прополис образуется на основе пыльцы, следовательно согласно теории д-ра КЮСТЕНМАХЕРА, он должен содержать азот­ные соединения, сахара и липиды, которые в пыльце находятся в отно­сительно больших количествах. Но результаты химических анализов не подтвердили этого. В прополисе не обнаружено даже в небольшом количестве и каких-либо других веществ, содержащихся в пыльце. С этой теорией не согласуются и многие другие физиологические, мор­фологические, биологические и анатомические данные, полученные, главным образом, ХАЙДАКОМ, ЭВЕНИУСОМ и РёШОМ, но кото­рые мы не приводим в настоящей статье.

В последнее время в ходе исследования прополиса появилось много объективных данных, поддерживающих теорию д-ра РЕША. При изучении химического состава прополиса установлено, в част­ности, что эта теория имеет под собой более реалистическую основу и более научное объяснение, и тем самым она ближе к действи­тельности.

Эта теория утверждает, в частности, что при сравнительном ана­лизе, вещества которые содержались в исследуемом прополисе, не­пременно обнаруживались в одном или в нескольких видах расте­ний, посещавшихся пчелами и выделения этих растений могли быть обильными источниками прополиса.

Самым важным выводом на настоящей стадии исследований было заключение об активном участии медоносной пчелы в образо­вании прополиса, который пчела, используя выделения своих желез, производит из растительных источников в том виде, в котором пче­ловод находит его в улье. Это активное участие пчелы доказыва­ется тем, что большинство флавоноидных веществ содержащихся в прополисе, не обнаружено в природе в свободном состоянии, напри­мер содержатся агликоны и не гликозиды, которые находятся в расти­тельном материале. Следовательно, пчела, по-видимому, содержит вещество, расщепляющее гликозиды на их основные составные, кото­рые затем попадают как в прополис, так и в корм.

Задача специалистов, изучающих биохимию медоносной пчелы, заключается в выделении этого вещества и определении его хими­ческого образования и происхождения прополиса.

Из приведенных аргументов следует, что нас ждет большая работа по окончательному установлению механизма образования про­полиса. Этот вопрос является однйм из основных для пчеловодной науки. В качестве возможно?» метода исследования для разрешения этого вопроса предлагаем анализ с использованием изотопов, который в настоящее время с методической и материальной точек зрения не представляет затруднений.

33

II

ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ПРОПОЛИСА

ПРОПОЛИС — НЕЯДОВИТЫЙ ПРЕПАРАТ

Д. ЛЕБЕДА ЮГОСЛАВИЯ

Резюме [1]

Автором проведены тесты для установления токсичности прополиса. Были использованы 6 собак, 10 морских свинок и крысы. Животным давали препарат с прополисом через рот. Перед этим их держали голодными в течение 12 часов. Со­бакам давали чистый прополис цилиндрической формы по 20—25 г. Применяемые дозы — 15 г/кг живого веса. В течение 48 часов не было отмечено какого-нибудь токсичного эффекта. Даже после применения вышеуказанной дозы в течение 9 меся­цев не было отмечено патологической реакции у собак. Морским свинкам и крысам давали следующий препарат: 50 г прополиса, 25 г пропиленгликола, 25 г подсол- нечннкового масла. Морским свинкам давали дозы по 10 г/кг, а крысам — 15 г/кг. В течение 48 часов не было симптомов патологической реакции. Через 3 месяца после прекращения применения прополиса отмечены его поздние эффекты.

МИКРОЭЛЕМЕНТЫ В ПРОДУКТАХ ПЧЕЛОВОДСТВА

Б. ОХОТСКИИ СССР

В литературе имеется много данных об определенном влиянии ми­кроэлементов на жизнь пчел, но мало сведений о влиянии. микроэле­ментов, содержащихся в продуктах пчеловодства, на организм человека.

Продукты пчеловодства — мед, пчелиный яд (апитоксин), маточ­ное молочко, прополис, перга и пыльца играют существенную роль в профилактике и лечении ряда заболеваний человека, так как они содержат аминокислоты, белки, углеводы, бальзамы, ферменты и, что очень важно, микроэлементы.

По данным советских и зарубежных авторов, к настоящему вре­мени считается установленным, что в продуктах медоносной пчелы со­держатся следующие микроэлементы: в меду — алюминий, бор, желе­зо, йод, свинец, сера, титан, фосфор, хлор, хром, цинк; в яде — железо, йод, калий, кальций, магний, марганец, медь, сера, хлор, цинк; в ма­точном молочке — железо, золото, кальций, кобальт, кремний, магний, марганец, никель, серебро, сера, хром, цинк; в прополисе — алюминий, ванадий, железо, кальций, кремний, марганец, стронций; в перге — барий, ванадий, вольфрам, железо, золото, иридий, кальций, кадмий, кобальт, кремний, магний, медь, молибден, мышьяк, олово, палладий, платина, серебро, фосфор, хлор, хром, цинк,-стронций.

У человека и животных ни один биохимический и физиологический процесс не происходит без участия микроэлементов. Они участвуют в обменных процессах (белковом, жировом, углеводном), синтезе белка

в организме, теплообмене, кроветворении, костеобразовании, размно­жении и иммунобиологических реакциях. Учеными доказаны взаи­модействие микроэлементов с витаминами, ферментами и гормонами.

Организм человека в основном получает микроэлементы из про­дуктов питания и воды.

Любопытно отметить, что большинство микроэлементов, которые содержатся в продуктах пчеловодства, обнаружены в крови и неко­торых органах человека.

Установлено, что в крови человека содержатся 24 микроэлемен­та, из которых 22 также входят в состав продуктов пчеловодства. При недостаточном поступлении в организм таких микроэлементов, как ванадий, железо, кобальт, медь, марганец, никель и цинк, нарушается процесс кроветворения. Введение этих микроэлементов с медом или маточным молочком, пергой и пыльцой способствует ликвидации воз­никшей анемии.

Известно, что в организме человека микроэлементы накаплива­ются избирательно в различных органах : цинк — преимущественно в половых железах, гипофизе, поджелудочной железе; йод — в щито­видной железе; медь — в печени и костном мозгу; кадмий и мо­либден — в почках; никель — в поджелудочной железе; литий — в легких; стронций — в костях ; хром, марганец — в гипофизе.

Концентрация микроэлементов в крови и тканях организма из­менчива, она меняется в зависимости от заболевания, возраста и других физиологических состояний и даже от времени суток и года.

Биологическая активность многих микроэлементов связана с тем, что они вступают во взаимодействие с ферментами и витаминами. Железо входит в состав дыхательных ферментов, цинк — в состав ферментов, принимающих участие в углеводном и белковом обменах.

Существует определенная зависимость между «количеством нахо­дящихся в организме витамина В_А и марганца, В₁₂ и кобальта. Эффект лечения витамином В* значительно выше, если в организм одновре­менно с пищей поступает достаточное количество марганца. В период образования костной ткани необходимы кобальт и медь, последняя имеет активную связь с витаминами А, В, С, Е и никотиновой кислотой.

Врач Б. М. ГЕХТ в эксперименте подтвердила, что добавление меди, йода и кобальта усиливает фагоцитарную активность лейкоци­тов, повышает устойчивость организма к различным инфекционным заболеваниям. Поэтому регулярный прием продуктов пчеловодства способствует повышению сопротивляемости организма не только бла­годаря содержанию витаминов, но и микроэлементов.

При некоторых заболеваниях в тканях организма нарушается обмен микроэлементов, что ухудшает течение болезни. Например, не­которые заболевания, такие как эндартерииты и кожные, сопровожда­ются снижением количества меди в тканях. И для успеха лечения, применяя комплексную терапию, необходимо вводить в организм' медь в микроконцентрации. Клинически и экспериментально подтверждено, что микроконцентрации цинка обладают свойствами снижать содер­жание холестерина в крови и нормализовать обмен.

Ряд заболеваний печени, гипертоническая болезнь глаукома при­водят к нарушению обмена кобальта, который усиленно выводится через кишечник и мочевыводящие пути. При введении кобальта наряду с гипотензивными средствами при вышеперечисленных заболеваниях у больных улучшается функциональная способность печени, ускоря­ется снижение как артериального, так и внутриглазного давления.

Приведенные примеры свидетельствуют о том, что содержание микроэлементов значительно увеличивает ценность продуктов пчело­водства и .что микроэлементы, принимая участие в обменных, фермен­тативных и витаминных процессах, способствуют излечиванию ане­мий, предупреждают атеросклероз, повышают иммунобиологические силы, ускоряют процесс лечения ряда заболеваний и обладают герон­тологическими свойствами.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА
И БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРОПОЛИСА
И ЕГО ИСТОЧНИКОВ

С. А. ПОПРАВКО, В. И. ТИХОМИРОВА Н. С. БУЛЬФСОН СССР

Разносторонняя биологическая активность прополиса позволяет все более широко использовать его в медицинской практике. В виду этого становится особенно важным выявление размаха колебаний его биологической активности, поскольку состав прополиса не является по­стоянным и заметно варьирует в зависимости от окружающей флоры, что, в итоге, может сказаться и на его биологической активности.

Ответ на этот вопрос предполагает глубокое изучение химиче­ского состава прополиса и растительных смол, являющихся его пер­воосновой, и сравнительное изучение их биологической активности.

В результате исследований, проведенных ранее в нашем Инсти­туте, было установлено, что основными растениями-прополисоносите- лями в Европейской части СССР являются береза, тополь и осина, причем первенствующее положение в этом ряду занимает береза боро­давчатая (ВеШа Vе^^исо5а). Этот вид является наиболее распростра­ненным лиственным растением в стране и расселен на очень большой территории, что, очевидно, и обусловливает его доступность медо­носным пчелам в большинстве пчеловодных зон. Действительно, как показывает химический анализ, на прополис березового типа прихо­дится и основная часть заготовливаемого в стране продукта.

В виду исключительно важной роли именно этого типа прополиса, он и был нами выбран в качестве основного объекта исследования.

Для сопоставления химического состава и биологической актив­ности прополиса и его предшественника — выделений пазушных почек березы мы выбрали два вида биологической активности — тесты на торможение роста отрезков колеоптилей пшеницы и про­растание семян и на антимикробную активность в отношении грам- положительных микроорганизмов.

Путем разделения спиртовых экстрактов прополиса и аналогич­ных экстрактов пазушных почек березы на пластинках с силикагелем в системе бензол-ацетон (8:2) с последующим тестированием элюатов зон было выявлено, что ростингибирующая активность и в случае прополиса и в случае почек сосредотачивается в одних и тех же зонах разделенных экстрактов, причем наибольшая активность приходится на зоны с рН 0.7—0.8. Изучение состава этих элюатов ранее разра­ботанными нами методами, включая хромато-масс-спектрометрию, по­казало, что основными компонентами этих зон являются 5-ОКСИ-4¹,?- диметокси-(1) и 5-окси-4¹-окси-7-метоксифлаванон (2). Оба соедине­ния содержатся в экстрактах обоих источников в количестве до 5— 7%. Удельная активность обоих флаванонов в тесте как на растяже­ние отрезков колеоптилей пшеницы, так и прорастание семян горчицы была близка к 5 10“⁵ М.

Другим ростингибирующим компонентом, ответственным за ак­тивность менее полярных зон, оказался ацетат — бетуленола (3), являющийся основным сесквитерпеноидным соединением экстрактов обоих исследуемых источников — прополиса и почек. Это маслообраз­ное соединение также оказалось выраженным ингибитором роста растений, причем характер проявляемого им ингибирования указы­вает на наличие у него фитотоксических свойств. Этот факт, по-види­мому, объясняет наличие аналогичной активности, свойственной про­полису и впервые выявленной французским исследователем ГОННЭ.

Помимо этих трех веществ, содержащихся в исследуемых экстрактах в особенно значительных количествах, в них были иденти­фицированы и ароматические кислоты: п-окси-(4) и п-метоксибензой- ная (5) и п-кумаровая (6), которые также обнаружили способность тормозить рост при концентрациях 10^_3 М.

Таким образом, подробное изучение одного из характерных био­логических свойств прополиса — подавлять рост и развитие растений привело к идентификации в нем 6 конкретных соединений, обладаю­щих высокой удельной активностью и содержащихся как в прополисе, так и в его источнике — пазушных почках березы. Важной особен­ностью этих соединений является то, что их биосинтез ецеплен, вслед­ствие чего они появляются и исчезают в почках лишь одновременно, причем пчелы предпочитают сбор тех выделений пазушных почек, которые обогащены этими компонентами.

Нами было также проведено сравнительное изучение и антими­кробных свойств прополиса и почек. При аналогичном разделении эк­страктов на силикагеле в системе этилацетат-гептан (1:1) и тестирова­нии элюатов на грамположительных микроорганизмах, включая устой­чивые к антибиотикам штаммы золотистого стафилококка, было уста­новлено, что наибольшей активностью отличаются элюаты зон с рН 0.5— 0.6. Причем, и в этом случае активность для обоих экстрактов прихо­дилась на зоны с одной и той же хроматографической подвижностью.

Хромато-масс-спектрометрический анализ • тетраметилсилильных производных этой зоны на колонках с 3% Е или 0—17 выявил и для почек березы и для прополиса наличие двух основных групп соеди­нений. Первую группу со значительно большим временем удержива­ния составляли соединения флавоноидной природы, в числе которых были идентифицированы акацетин, эрмапин и пектолинарингенин; вторая же группа соединений с несколько меньшим временем удер­живания была представлена 3 соединениями гликозидной природы, химическое строение которых к настоящему времени еще полностью не выяснено. Помимо этих двух основных типов соединений, в биологи­чески активной антимикробной фракции прополиса была выявлена и п-кумаровая кислота, для которой также была ранее показана слабая антибактериальная активность.

Поскольку удельная активность входящих в эту фракцию фла- воноидиых агликонов заметно ниже всей фракции в целом, это служит указанием на принципиальную роль в активности дрополиса этой новой гликозидно-связанной группы соединений. Важным и инте­ресным является то, что эти вещества в аналогичных количественных соотношениях присутствуют и в экстрактах пазушных и пробужден­ных (весенних) почек березы.

Таким образом, основным источником биологической активности прополиса в отношении выбранных нами биотестов являются не спе­цифические продукты биосинтеза медоносных пчел, а защитные выде­ления растений. Повышение эффективности антимикробной защиты гнезда у медоносных пчел, очевидно, происходило, главным образом, не путем развития способности продуцировать собственные антибио­тики, а в выборе наиболее эффективных растений-прополисоносителей и генетическом закреплении механизмов их распознавания.

Сравнительное изучение химического состава другого важного типа прополиса — тополиного, показало, что свойственная ему группа ароматических кислот и флавоноидных соединений отличается от ана­логичных веществ березы и прополиса березового типа, главным обра­зом, пониженной степенью гидроксилирования их ароматических ко­лец, в частности, кольце В в случае флавоноидных агликонов. Однако изучение зависимости биологической активности от химического строе­ния в ряду этих соединений показывает, что эти изменения не явля­ются принципиальными для активности. Очевидно, именно это и обу­словливает наблюдаемый факт сравнительно однотипной и равной по уровню биологической активности суммарных экстрактов прополиса березового и тополиного типа.

Описываемые факты свидетельствуют о тесной связи защитных систем двух различных видов организмов — насекомых и высших растений, причем растению и в этом случае принадлежит первен­ствующая роль в биосинтезе особенно эффективных защитных ком­плексов соединений. Пчелы же являются уникальным видом обще­ственных насекомых, наделенных способностью выявлять такие наи­более эффективные защитные эксудаты растений и накапливать их в количестве, достаточном не только для внутренних потребностей улья, но и для частичного их отбора в интересах человека.

ЛИТЕРАТУРА

1 ПОЛРАВКО С. А , Пчеловодство, 27—29 (1977).

'I. ПОПРАВКО С. А., Пчеловодство, 34—36 (1976).

3. ССДОЫЕТ, Апп. АЪеШе, 1968, 11 (17, 41—47, 105—106).

ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ ПРОПОЛИСА
ИЗОЛЯЦИЯ и ИДЕНТИФИКАЦИЯ 4-ОКСИ-З-МЕТОКСИ
КОРИЧНОЙ кислоты ИЗ ПРОПОЛИСА

И. ЧИЖМАРИК, И. МАТЕЛ ЧЕХОСЛОВАКИЯ

Для дальнейшего успешного биохимического, фармакологи­ческого и клинического исследования прополиса следует, безусловно, знать его точный химический состав. До сих пор найдено в прополисе в общем 19 веществ разной химической структуры.

В прополисе описаны коричная кислота и коричный алкоголь, хризин (КЮСТЕНМАХЕР, ЖОБЕР) « ванилин (ДИТРИХ). Совет­ский исследователь ПОПРАВКО нашел в прополисе изованилин, ака- цетин, кемферид, рамноцитрин, кверцетин, пиностробин, 5-окси-7,4- диметоксифлавонон:  5,7-диокоигЗ,4'Д»метоксифлавон, 3,5-диокси-7,4-

диметоксифлавон и 5-окси-7,4-диметоксифлавон. Мы выделили из про­полиса и идентифицировали кофейную кислоту, а французские иссле­дователи под руководством V. К. УНХАГШЕУА идентифицировали в прополисе галангин, хризин, тектохризии, изальпинин и пиноцембрин.

Предварительные опыты и результаты бумажной и тонкослойной хроматографий показывают, что прополис содержит еще целый ряд до сих пор не идентифицированных соединений. Поэтому в своем иссле­довании мы стремились их определить.

Анализ проводили по следующей схеме. Экстракция : 1000 г про­полиса экстрагировали в 2 л безводного бензола без нагревания в течение двух дней. После фильтрации раствор бензола был удален дистилляцией в вакууме и осадок экстрагирован одним литром без­водного этилового спирта. Экстракцию вели в течение 24 часов без нагревания. Полученный красно-коричневый раствор подвергли дистил­ляции для полного удаления жидкости и экстрагировали в 500 мл холодной воды в течение 3 дней. Остаток после экстракции пере- кристаллизировали в горячей воде. Выделившиеся кристаллы отде­лили и растворили в 10 мл безводного спирта. Полученный раствор был нанесен на тонкий слой силикагеля и хроматографирован в системе бензол-диокеан-уксусная кислота в соотношении 90:25:4. С помощью облучения ультрафиолетовыми лучами было установлено, что хроматограмма содержит 5 соединений. Нами выделенная и опи­санная кофейная кислота имела полосы при К/ = 0,24.

В зоне с В/¹ =0,50 находилось вещество, которое имело синюю флуоресценцию под ультрафиолетовыми лучами и эту зону экстраги­ровали этиловым спиртом, упаривали и кристаллизовали.

Из 15 таким образом полученных зон спиртовой экстракт был удален сушкой полностью. Полученные мелкие кристаллы после пе­рекристаллизации в горячей воде имели точки плавления 168°. Так как вещество с такой точкой плавления не было еще обнаружено в прополисе, мы сосредоточились на его идентификации.

Идентификация. Спиртовый раствор выделенного вещества пока­зал характерные химические реакции на присутствие карбоксильной и гидроксильной групп, двойной связи и реакцию, доказывающую при­сутствие метоксигруппы.

При исследовании спиртового раствора в ультрафиолетовых лучах мы определили максимум абсорбции при длине волны 322 тм.

ОСИ

з

По результатам исследования этого вещества с помощью бумаж­ной и тонкослойной хроматографии, инфракрасного света и спектра ядерного магнитного резонанса мы определили, что оно является 4- океи-3-метокси коричной кислотой, которая в химической литературе называется также феруловой и имеет следующую структурную формулу

Правильность предположения была доказана исследованием ве­личины К выделенной кислоты и контрольного раствора кислоты. Оба вещества имели одинаковые величины К/, характер поглощения уль­трафиолетовых и инфракрасных лучей.

Фармакологическое действие. Феруловая кислота отличается ан­тибактериальным действием (грамположительным и грамотрицатель- ным) и способствует бактерицидному и бактериостатическому дей­ствию прополиса, что описано уже несколькими авторами.

Кроме того, проявляется в значительной степени вяжущее дей­ствие, используемое при лечении трудно заживающих ран при помощи мази, приготовленной из спиртового раствора прополиса, и желчевы­делительное действие, описанное в 1938 г.

Феруловая кислота находится главным образом в млечном соке корня Реги1а $оеИйа, в смоле Орорапах сЫгопгит, СаШра <юа1а и в А]идаюа. Кроме того, имеется также в Еди1зе1ит Метпсйа, БаНИа оапрЫНз и ВегЬеггз атигепзгз.

В прополис феруловая кислота попадает в основном из смолы Ртиз 1аггсгз, где эта кислота была‘найдена еще в 1876 г. из Ргпиз сетЪга и смолы елей.

С этих растений пчелы очень интенсивно, главным образом, осенью собирают смолу, как основную составную часть прополиса. Пчела может эту кислоту синтезировать и в качестве вторичного про­дукта расщепления гликозидов растений, в которых феруловая кисло­та присутствует как агликон.

Ввиду того, что в пыльце эта ненасыщенная кислота еще не найдена, обнаружение ее в прополисе служит важным аргументом против теории Кюстенмахера и в пользу того мнения, что прополис собирают пчелы из смолистых выделений почек и коры разных растений.

К. ЯНЕШ В. БУМБА ЧЕХОСЛОВАКИЯ

В лаборатории косметики Научно-исследовательского института производства жиров, в Праге, мы занимались между прочим и изу­чением состава и свойств прополиса. И так как, по нашему мнению, мы пришли к интересным выводам, мы хотели бы кратко изложить эволюцию проведенных опытов.

. Во первых, мы изучали свойства экстрактов, полученных при помощи разных растворителей в 11 пробах прополиса; исследования проводили в ультрафиолетовой зоне спектра для оценки возможностей использования экстрактов прополиса, как фильтров солнечного излу­чения. Выводы из этих опытов следующие :

а)    Самые лучшие результаты получены с экстрактом прополиса на основе этилового спирта (отношение 1 : 10, экстракция 24 часа) ;

б)    Во всех экстрактах в пределах от 200 до 370 пц была макси­мальная характеристика в длинах волн 235, 285 и 314 пи — даже если обнаружены некоторые различия в зависимости от количества.

в) Действие прополисных экстрактов не зависит от их цвета.

Это свойство явно вызвано больше всего производными корич­ной кислоты и некоторыми соединениями галловой кислоты.

Позже мы попытались выделить эти действующие начала. Во время этого процесса нам удалось получить характерную кристалли­ческую смесь, которую мы подробно изучили.

Опыты

Из 150 г прополиса мы удалили воск при помощи нагревания в 350 мл воды. Эту процедуру мы повторили два раза до полного устра­нения пчелиного воска. Остаток дистиллировали в водяном паре, полу­чив таким образом 3 л дистиллированного вещества. После его филь­трации произвели вытяжку этиловым спиртом в несколько этапов. Из общего количества экстракта на каждом этапе удаляли слой эфира при помощи дистилляции, получив в итоге около 50 мл. В течение 20—24 часов, иногда даже раньше, из этого раствора выделялись характерные кристаллы, покрытие масляной оболочкой. Эти кри­сталлы растворили в смеси этилового эфира — петролейного эфира в пропорции 1 : 1, затем кристаллизовали снова. Точка плавления этого вещества была 115—118°Ц. При микроскопическом исследова­нии, кроме кристаллов установлено наличие капель похожих на масляные. Кристаллическое вещество, полученное в результате четы­рехкратной дистилляции в водяном паре, было перемешано и подвер­жено фракционированной сублимации. В результате этого процесса получили 3 фракции. Первая из них содержала, в основном масляную составную, вторая была кристаллической, а третья содержала много примесей.

Вторая фракция была снова кристаллизована в эфире и полу­ченное таким образом вещество имело точку плавления 122°Ц. Веще­

ство анализировали при помощи инфракрасной спектроскопии и маг­нитного ядерного резонанса и определили как бензойную кислоту. Это вещество проверили в дальнейшем при помощи тонкослойной хрома­тографии в лфех разных системах :

а)    в системе ацетон — петролейный эфир 1 : 3 на силуфоле, по методу Лимана (1). Значение Ш соответствовало стандартному зна­чению бензойной кислоты, 0,35 ;

б)    в системе этанол-вода-аммоний (25%) 25 :3 : 4 на силуфоле по методу Браун-Геенена (2) значение Ш соответствовало стандарт­ному значению бензойной кислоты.

в)    в системе этиловой кислоты петролейного эфира 3 : 7 вели­чина Ш соответствовала стандартной величине бензойной кислоты (М 0,7).

. Другие определения были проведены при помощи хроматогра­фии на декстриновом геле, и наличие бензойной кислоты было дока­зано сравнением полученных объемов со стандартной величиной. Во время этого процесса установлено, что фракция № 2 содержала, кро­ме бензойной кислоты и небольшое количество неизвестного веще­ства. Наличие этого вещества было установлено и при тонкослойной хроматографии во всех вышеупомянутых системах. Речь идет об аро­матическом веществе, которое при 254 ш» имеет сильную флюоресцен­цию светло-синего цвета. Из наблюдений, проведенных до сих пор, можно сделать вывод, что мы имеем дело с ароматическим, одноядер­ным веществом с моллекулярным весом выше, чем у бензойной кис­лоты. Его наличие было установлено в разных количествах, во всех трех фракциях, полученных в результате фракционированной субли­мации. В первой и третьей фракциях эти два вещества, соответствен­но бензойная кислота и флюоресцентное вещество, сопровождаются большим количеством других элементов. В дальнейшем мы займемся определением вещества, которое сопровождает бензойную кислоту для установления, идет ли речь об уже известном веществе, входящем в состав прополиса, или о веществе, которое предстоит определить.

В своих работах мы доказали наличие в прополисе бензойной кислоты. Из 50 г прополиса получили 1—2 г кристаллической смеси. Из 150 г прополиса получили 1—2 г кристаллической смеси, которая содержит почти 50% бензойной кислоты. Количество полученной кри­сталлической омеси колебалось в зависимости от соотношения воска и битумов в разных образцах изученного прополиса.

Наличие в прополисе бензойной кислоты можно объяснить тем, что он находится в природе в большом количестве растений (чернике, тополевых почках и др.), из которых пчелы собирают его вместе с другими веществами.

Учитывая это влияние бензойной кислоты на микроорганизмы, можно сделать вывод, что она способствует вместе с другими веще­ствами бактериостатическому и бактерицидному действию прополиса.

ЛИТЕРАТУРА

1.   ЬУМАЫ К. Ь. е* 11. ;г. Ог*. сЬет. 23. 759 <1(М)

2.    ВКАТЖ О., Оеепеп Н. .1. сЬготаедгарЬу 9, звз (1992)

III

РАЗЛИЧНЫЕ СВОЙСТВА ПРОПОЛИСА

ДЕЙСТВИЕ ПРОПОЛИСА НА Р5Е^^ОМОNАЗ АЕШСШ05А

Ш У1ТКО

Р. И. АНАСТАСИУ РУМЫНИЯ

Многие исследователи изучали антибиотическое действие пропо­лиса на ряд возбудителей. Некоторые авторы в своих работах описы­вают методы экстрагирования фракций прополиса (водная и спирто­вая вытяжка) без указания, техники проверки эффекта препаратов на микробные культуры (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11). Как показывает ЛАВИ (3), прополис и его фракции оказывают различные антибио­тические эффекты. Следует отметить также, что в своих опытах авторы не применяли стандартные лабораторные микробные штаммы, которые можно найти в специальных институтах различных стран. Ряд авторов работали с Рзеийотопаз аегидгпоза (РА). КИВАЛ КИНА, НАМВЬЕТСЖ, УЕКСЕ получили положительные результаты, но ЬАУ1Е не подтверждает этих результатов. Данные не совпадают, вероятно, из-за различий в методах работы и разного по качеству прополиса.

Материал и методика

Мы использовали 80%-ный спиртовой раствор прополиса, полу­ченный путем разбавления мягкой вытяжки прополиса в 96°ном спирте (13).

Нами исследованы 13 штаммов РА, 9 из которых были получены из института «Д-р И. Кантакузино» в Бухаресте и 4 — от больных с заражением мочевых путей или с ранами. Были использованы сле­дующие лабораторные штаммы : 12361/68 ; 12559 I. НАВЗ 01 ; 12561 I. НАВЗ 03 ; 12562 I. НАВЗ 04 ; 12564 I. НАВЗ 06 ; 12565 I. НАВЗ 07 ; 12566 I. НАВЗ 08 ; 12568 I. НАВЗ 010 ; 12569 I. НАВЗ 011.

Нами получены антибиограммы общепринятой методикой на агаре микротаблетами антибиотиков и химиотерапевтических средств.

Метод тестирования чувствительности состоит в определении минимальной ингибирующей концентрации (МИК) и минимальной бактерицидной концентрации (МБК) по ,1оЬп РНА1В, СНАТКСНА1, 1УАТАНАК1ШАК01Ш, ТЬошаз ВАИШЗТЕК (14).

МИК определяли стандартным методом разбавления в стан­дартных пробирках при использовании 1 мл раствора. В каждую про­бирку отбирали 0,5 мл питательного бульона, после' чего добавили в первую 0,5 мл 80%-ного спиртового раствора прополиса. Затем осу­ществляли последовательно серийные разбавления в остальных 12 про­бирках. Пробирка 13 прополиса не содержала и служила положи­тельным контролем. Затем в каждую пробирку отбирали по 0,4 мл бульона и промывали физиологической сывороткой 18-часовую куль­туру РА на косом агаре. Суспензию разбавляли нефелометрическим способом до получения концентрации 1 миллиард возбудителей в 1 мл. Затем разбавляли до 1/100 и накапывали в каждую пробирку по 0,1 мл. Последняя концентрация была 10⁶ возбудителей в 1 мл. МИК выражена концентрацией прополиса в последней трубке с про­зрачной жидкостью спустя 18—24 ч. после инкубации при 37°С.

МБК определяли через 36—72 ч путем непосредственного ана­лиза пробирок. Эффект проверяли субкультурой на агаре: субкуль­туры из пробирок, где через 36—72 ч. значительного роста не отме­тили, остались бесплодными или же развили не более 25 колоний. Эта же техника нами применена и в первом контроле, то есть при использовании в 0,5 мл 96°ого спирта.

Результаты

Полученные нами антибиограммы показывают значительную устойчивость к обычным антибиотикам и химиотерапевтическим сред­ствам у 11 из 13 штаммов, за исключением штаммов 12584 I. НАВЗ 08 и 12569 I. НАВ8 011, которые чувствительны к Бисептолу, Ко- листину, Полимиксину и в меньшей степени к Бацитрацину и Неомицину.

Нами отмечено, что в первых пробирках, то есть при концен­трации 12,5% прополиса и 12,5% спирта, не было роста. При кон­центрации 6,25% прополиса и 6,25% спирта рост отмечен только у одного штамма (12351). При 6,25% спирта отмечен рост у штаммов ДКУ, 12559 I. НАВ8 01, 12564 I. НАВЗ 06, 12568 I. НАВ8 010 ; 12569 I. НАВЗ 011.

При концентрации 3,125% прополиса и 3,125% спирта развились 3 штамма ; 12559 I. НАВЗ 01, 12562 I. НАВЗ 04 и № 3. Концентрация 3,125% спирта не ингибировала рост ни у одного из 13 штаммов. Можно заключить, что у трех штаммов: 12351, 12562 I. НАВЗ 04 и № 3, то есть у 23% исследованных штаммов, не отмечено различий в процессе роста.

У 5 штаммов (38,5%) существуют различия в одном разбавле­нии, а у остальных 5 штаммов (36,5%) отмечены различия в двух разбавлениях. Таким образом отмечены достоверные различия у 77% исследованных штаммов.

Дискуссии

По сравнению с КИВАЛКИНОИ, НАМВЬЕТОЫ, УЕНСЕ, мы получили результаты только для 77% исследованных штаммов; сравнительно же с ЬАУ1Е мы отметили, что часть штаммов РА очень чувствительна к спиртовому раствору прополиса, а именно: к .6,25%- ному раствору — 12 штаммов, то есть 92,3% из общего числа штам­мов, а к 3,125%-ному раствору — 9 штаммов (69%).

По всей вероятности, прополис действует непосредственно, бла­годаря содержащимся в нем антибиотическим веществам или же ка­тализирует действие спирта. Во всяком случае применение гп пИго спиртовых растворов прополиса (при концентрации выше 3—6%) вызывает ингибирование роста РА.

Из вышесказанного вытекает, что эффективны только растворы с высокой концентрацией прополиса. Это значит, что при высокой степени заражения РА спиртовые растворы прополиса целесообразно применять только местно. Об этом свидетельствуют и другие изве­стные свойства спиртовых растворов прополиса — гемостатическое, местноанестезирующее, а также местнотрофический и регенерирующий эпителии эффект.

При сравнении микробных штаммов зарегистрированы значи­тельные различия между грамположигельными возбудителями (очень чувствительными к прополису) и грамотрицательными, в том числе РА (12) (менее чувствительными).

Проведенные нами исследования следует проверить гп шсо на лабораторных животных с ранами, сильно пораженными РА, и затем в условиях клиники.

ЛИТЕРАТУРА

1.   ГРЕЧАНУ, В., В. ЙЕНЧУ — Антибиотический эффект прополиса, пыльцы и меда —

Новые исследования по апитерапии, Изд-во АПИМОНДИИ, Б. 175.

2.   КИВАЛКИНА, В. П. — Итоги и перспективы изучения прополиса, Новые исследования

по апитерапии, Изд-во АПИМОНДИИ, Б., 201.

3.    ЛАВИ, П. — Прополисный антибиотик. Прополис, Изд-во АПИМОНДИИ, Б., 33.

4.    АЛЕКСАНДРОВ, Ю. С., Л. Н. ДАНИЛОВ — Бактерицидные свойства прополиса, Про­

полис, Изд-во АПИМОНДИИ. Б., 38.

5.    ПАЛМБАХА, С. Э. — Изучение антимикробного действия прополиса на микрофлору желу­

дочно-кишечного тракта, Прополис, Изд-во АПИМОНДИИ, Б. 41.'

6.    ШЕЛЛЕР, С., Ж. ТУСТАНОВСКИИ, 3. ПАРАДОВСКИИ - Сравнительное изучение чув­

ствительности стафилококков к прополису и антибиотикам, Прополис, Изд-во АПИМОН­ДИИ. Б. 43

7.    ВЬЕХЕТ, Л. — Влияние прополиса на ряд видов микроорганизмов и плесеней, Прополис,

Изд-во АПИМОНДИИ, Б. 46.

. 9. ДЕРЕВИЧ, Аделина, Ал. ПОПЕСКУ, Н. ПОПЕСКУ — Вклад в изучение биологических свойств прополиса, XX Международный конгресс по пчеловодству АПИМОНДИИ, Бу­харест 196а, 122.

10. ЛАВИ, П. — О происхождении прополиса, XXII Международный конгресс по пчеловодству АПИМОНДИИ, Мюнхен 1969, Б. 188.

И. 1АЛ71Е, Р. — Ьез виЬвТапсез апШло1к}иез бапв 1а соЮШе й’аЪеШе, Ап д’аЬеШе, 2, 1960, р. 103.

12.    ОЬШ1С1, N.. А. ГИ.ОТТ1, 3. ЬЕЗСШЗКУ, Н. I. АКАЗТАЗШ — Е1ес1е1е сагас^ейозШЮе

$1 Ьас(ег1с1(1е а1е ргороИзиНН авирга еегтепПог <11п со1ес(1а 1пзШиШ1и1 „ог. I. сап- 1асиг1по“.

13.    ПАЛОШ, Елена. Н. ПЕТРЕ, Констанца АНДРЕЙ — Технология получения мягкой вытяжки

прополиса для применения в фармацевтике, Новые исследования по апитерапии, Изд-во АПИМОНДИИ, Б. 155.

14.    РНА1Н, I. — 1п рИго вивсерИЫШу о/ Рвеидотопав аегидтова, ю сагЬоп1сШ1п — Арр1,

Шсгор. верь. 69, уо1. 18, N0. 3, р. 303.

ИНГИБИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОПОЛИСА
НА НЕКОТОРЫЕ ВИРУСЫ РАСТЕНИИ

В. БОИНЯНСКИИ В. КОСЛЯРОВЛ ЧЕХОСЛОВАКИЯ

Прополис используется пчелами для непроницаемой изоляции улья, сглаживания стенок ячеек сотов, скрепления рамок, замуровы­вания мертвых насекомых или более крупных животных, на дне или на стенках улья. К его производству имеют отношение различные клеи, смолы и красители, собираемые пчелами в природе и приноси­мые ими в улей, а также и непереваримые частицы зернышек пыльцы, воска и минеральных веществ.

Цвет прополиса бывает различным : зеленый, зеленовато-корич­невый, коричневый, желто-коричневый, бурый почти до черного. Плот­ность прополиса больше, чем у пчелиного воска, а если его опустить в воду, он погружается на дно. Он нерастворим в воде и лишь частично растворим в спирте; легко растворяется в эфире и в хло­роформе. При температуре 15° он тверд и хрупок. При более высо­кой температуре он размягчается и становится липким. Плавится при 60—69°Ц. Его химический состав еще недостаточно изучен. Вообще можно утверждать, что прополис содержит клеи, смолы, воск и дру­гие вещества.

Прополис оказывает сильное бактерицидное и бактериостати­ческое действие. В улье трупкй животных, которые пчелы обволокли прополисом, не гниют. Действие прополиса обусловлено в большой степени его химическим составом. Его анестетический эффект исклю­чителен : в 3,5 раз больше, чем эффект новокаина. Из-за этих качеств прополис находит широкое применение в медицине и ветеринарии (КУРИЛО, 1970 г.).

В вирусологии растений, где также изучаются патогенные воз­будители, до сих пор нет сведений относительно опытов с прополисом. Обыкновенно работают с ингибиторами — веществами устраняющими заражение или сокращающими размножение вируса в клетках пора­женного растения. Речь идет о веществах как органического так и неорганического происхождения, чистых с химической точки зрения, а также о веществах комплексного характера, не определенных с хи­мической точки зрения. Среди последних — вытяжки из различных видов растений, кислое молоко и т.д. Прополис можно классифици­ровать как одно из веществ ингибирующего воздействия.

Методика и результаты

Для своих экспериментальных целей мы приобрели прополис у пчеловода из Братиславы. Мы изготовили 10%-ный раствор, взбалты­вая в течение 30 минут сосуд с 25% этанолом и прополисом. Раствор настаивался сутки, затем его опять взболтали и профильтровали через марлю для устранения грубых примесей. После стабилизации, уста­новился темно-коричневый цвет. Полученный таким образом раствор прополиса был подвергнут консервированию без доступа света, при температуре —3°----------- 9°Ц.

Для экспериментов с прополисом мы использовали три вида вирусов: вирус мозаики огурца, изолированный с вида РНуЬоЫсса атепсапа (Кослярова, Бойнянский, 1972 г.), вирус пятнистости таба­ка и вирус некроза табака, изолированный на бересклете европейском (ЕVопути8 еигораеа) (Бойнянский и Кослярова, 1968 г.). Для пер­вых работ мы использовали 10%-ный раствор прополиса в 25% этаноле.

А                      В                     С График М I. Влияние различных способов применения прополиса к различным вирусам А — Вирус мозаики огурца В — Вирус пятнистости табака С — Вирус некрова табака 1   — Контроль 2   — Посев вируса, применение через 5 минут прополиса 3   — Смесь вируса с прополисом 4   — Применение прополиса через 5 минут после посева вируса.

В первом опыте мы использовали следующие различные спо­собы применения:

а)    заражение листьев белой фасоли (РНааевЫв ои1даггз), виру­сом мозаики огурца или вирусом пятнистости табака, возможно зара­жение листьев огурца (Сиситгз зайоиз со. ОеИсаЬев) вирусом некроза табака, а по истечении 5 минут — применение 10%-ного раствора прополиса на зараженные листья ;

б)    применение на листья фасоли или зародышевые листочки огурца 10%-ного раствора прополиса, а через 5 минут посев соот­ветствующего вируса;

в)    смешивание штамма вируса с 10%-ным раствором прополиса из расчета 1:1;

г) посев контрольного вируса, без использования прополиса.

Полученные результаты этих опытов отражены в графике № 1.

Самая пониженная чувствительность была выявлена для вируса

мозаики огурцов, а самая высокая для вируса некроза табака. Самую слабую действенность обнаружил способ посева вируса + применение после этого прополиса. В случае этого способа, число повреждений на листьях было сокращено на 20—55% по сравнению с контролем. Более действенным оказалось применение смеси вирус + прополисный раствор на листья фасоли и на зародышевые листочки огурца тем же самым способом, сразу же после смешивания обоих компонентов. При применении этого способа, число повреждений сократилось на 36— 62%. Максимальный эффект был обеспечен применением прополисного раствора на листьях испытанных растений, а затем, через пять минут, заражением соответствующим вирусом. В этом случае, число повреж­дений понизилось на 62—85%.

В течение второго опыта мы использовали вирус с самой боль­шой чувствительностью, соответственно, вирус некроза табака а также самый целесообразный способ применения — наложение на зароды­шевые листочки огурца 10% раствора прополиса а затем заражение вирусом. По сравнению с контролем мы получили снижение заражен­ности примерно на 57% (график 2, А). Вирус некроза табака вызвал на зародышевых листочках огурца некротические повреждения, выра­жение местного характера, которые можно было легко сосчитать, но вирус легко проник и во все растение. Мы намеревались также про­верить насколько быстро вирус доходит и размножается в корнях, стебле, зародышевых листочках и листьях огурца. С этой целью мы провели новый посев (через 17 дней), используя сок извлеченный из различных частей растения как из контрольного материала, так и из материала, в который вводился прополис. Результаты опыта проиллю­стрированы графиком № 2.

В корнях обработанного прополисом материала наблюдалось приблизительно в 12 раз меньше количество вируса чем в корнях кон­трольного материала. В стеблях обработанного материала обнаружи­лось приблизительно в 2 раза меньше вируса по сравнению с заро­дышевыми листочками контрольного материала. В настоящих листьях огурца не было обнаружено вируса — в случае обработанных пропо­лисом материалов, в то время как в контрольном материале вирус появился, хотя и в уменьшенном количестве, приблизительно 5% по сравнению с зародышевыми листочками контроля.

Третий опыт был проведен тоже с вирусом некроза табака на зародышевых листочках огурца. Целью опыта было определение воз­можности разбавления прополиса, возможное уменьшение действия прополиса в зависимости от увеличения разбавления. Первая часть опыта была проведена с большими концентрациями соответственно 10%, 1% и 0,1% в трех последовательных сериях. Вторая часть опыта была выполнена с низкими концентрациями, соответственно 10~² до 10~⁸ в двух последовательных сериях. Результаты отражены в гра­фике № 3. По сравнению с контролем мы получили почти во всех случаях уменьшение ниже 50%.

В ходе четвертого опыта мы использовали классический вирус мозаики табака, с вирусными частицами в виде палочек. Были исполь­зованы два йида табака, соотв. ШсоНапа гизНса и ШсоИапа дЫИпоза, на листьях которых высеянный вирус образует четкие некротические повреждения. У N. гизНса листья были обработаны прополисным раствором в концентрации 10^-5, а через сутки был высеян вирус мо­заики табака. В случае N. дЫИпоза вирус был высеян лишь через 48 часов. Результаты отражены в графике 4.

В первом случае этой серии опытов, число повреждений пони­зилось на 65,5%, во втором случае — на 56,3%, что вообще соответ­ствует (принимая во внимание поздний посев вируса после введения

А В                        СОЕ

График Ж 2. Влияние прополиса на размножение вируса некроз» табака, в различных частях растения (огурец)

1   — Контрольный материал

2    _ Материал, обработанный прополисом А— Число повреждений на завязи огурца

В — Концентрация вируса в корнях растения С — Концентрация вируса в стебле растения О — Концентрация вируса в зародышевых листочках Е — Концентрация вируса в листьях

График М 3. Тормозящее действие прополиса на образование повреждений, вследствие посева вируса некроза табака на зародышевые листочки огурца К — контрольный материал 1 и 2 — обработанный прополисом материал

—    процент повреждений сравнительно с контролем (на ординате)

—    концентрация прополиса в процентах (на абсциссе)

График М 4. Ингибирующее действие прополиса (в концентрации 10*6) на вирус иозаики табака

А —14. тиаИеа В — N. дШИпога

1    — Контроль

2     — Обработанный прополисом материал, через 24 часа засеянный вирусом мо­

заики табака

3     — Обработанный прополисом материал, через 48 час. засеянный вирусом мо­

заики табака

— Процент повреждений, по сравнению с контролем (на ординате)

График М 5. Воздействие тепла на тормозящее влияние проволнса К — Контроль

—     согревание прополиса в минутах (на абсциссе)

—     число повреждений на одном листе (на ординате)

49

4 — Прополис

прополиса) ингибирующему действию прополиса на сферический вирус некроза табака.

В пятом опыте мы проверяли чувствительность прополиса, сохра­нение его ингибирующего влияния на вирусы растений при нагрева­нии разной интенсивности и продолжительности. В течение опыта работали с двумя вирусами, соответственно с вирусом некроза табака и пятнистости табака, используя температуры в 60°Ц, 80°Ц и 100°Ц, в течение 5, 10, 20, 30 и 60 минут.

Прополис в концентрации 10^-5 нагревался и выдерживался опре­деленное время при соответствующей температуре в пробирках с тон­кими стенками, в водяной бане, а затем охлаждался в проточной воде. Как контрольный материал были использованы необработанные прополисом растения. Результаты опытов проиллюстрированы гра­фиком № 5.

Активность прополиса меньше всего изменялась при температуре . 60°Ц и больше всего — при температуре 100°Ц. В случае вируса пятнистости табака, короткий нагрев (20 минут) при температуре 80 и 100°Ц уменьшил активность прополиса больше, чем нагрев продол­жительностью 60 минут. В случае вируса некроза табака наблюдался подобный эффект при нагреве в течение 10 минут (при 80°Ц), даже в течение 20 минут (при 100°Ц). В заключение можно утверждать, что прополис большей частью сохраняет свое ингибирующее влияние на вирусы даже и после того, как он был подвергнут в течение более или менее продолжительного периода воздействию высоких темпера­тур ; это значит, что ингибирующее действие прополиса отличается большой устойчивостью.

Обсуждение

До сих пор не было сведений об использовании и испытании влияния прополиса на вирусы растений. Предполагаем, что достигну­тые нами результаты являются первыми сведениями этого рода.

Прополис обнаружил несомненно ингибирующее действие на все четыре вируса, использованные в опыте, и оно было довольно силь­ным. Три вида из этих вирусов обладали круглыми частицами, но несмотря на то что они сходны, их чувствительность была различной. Самая высокая чувствительность была обнаружена у вируса некроза табака, а самая низкая — у вируса мозаики огурца, соответственно, у его штамма, изолированного с РкуШасса; у четвертого вируса частицы имели вид палочек и, по-видимому, их чувствительность к прополису почти подобна чувствительности круглого вируса некроза табака.

Приведенные в графике № 2 результаты четко показывают, что прополис не только сокращает число повреждений на засеянных вирусом листьях, но и явно затормаживает размножение вируса во всем растении.

На данном этапе мы еще не в состоянии объяснить более выра­женное действие прополиса при пониженных концентрациях (опти­мальные результаты были получены при концентрациях в 10~³ — 10^-7). В этих случаях, речь идет либо о влиянии физиологического

состояния растений (опыты были произведены последовательно а не одновременно), либо о действии среды или другого неконтролируемого фактора. Все-таки из последнего опыта можно сделать вывод что прополис сохраняет свою действенность даже в очень низких концен­трациях, что может иметь особое практическое значение в случае воз­можного использования с целью защиты более чувствительных куль­тур, в особенности тепличных, рассады и вообще молодых растений. Ингибирующее действие прополиса на вирусы обладает значительной устойчивостью которая сохраняется в большой мере при более высо­ких температурах.

Резюме

Предварительные опыты, произведенные с прополисом продемон­стрировали его сильное ингибирующее действие на три вида сфери­ческого вируса — соответственно вирус мозаики огурца, изолирован­ный с РНуШасса атепсапа, вирус пятнистости табака и вирус некро­за табака, изолированного с бересклета, а также палочкообразный вирус мозаики табака. Прополис сокращает не только число повреж­дений на засеянных вирусом листьях но, одновременно, явно затор­маживает размножение вируса во всем растении. Прополис проявил высокую активность и в случае пониженных концентраций, что может иметь значение для использования этого вещества в практике меро­приятий по защите культур.

| ЛИТЕРАТУРА

V. ВОЛ?А№КУ, V. КОЗШАНОУА :                 Еиопушиз тоза1с. — В1о1. Р1ап*. 10, 322—324 (1368).

СШ1УЬО, 3. : Ргоро11з )еЬо з1о2еп1, у1аз№оз(1 а ргакИскё ууи2Ш, СШЪоГпё уОДДгзке ргек1айу 4, 57—67 (1370).

РЗгС2ЕЬАК8ТУО, 10, 6 (1361).             '

V. КОЗЫАВОУА, V. ВОЛ)А№КУ : АНешр* (о сЬагас1ег1ге а у1гиз 1зо1а(е<1 1гот РЬу(о1асса атег1сапа 1п СгесЬоа1оуак1а Р1ат У1го1овУ Ргос. 7№ СопГ. Сгес1юз1оу. Р1. У1го1., н1йЬ та(газ, 1371 (у. иа«1).

ВЛИЯНИЕ ПРОПОЛИСА НА РЯД ВИДОВ
МИКРООРГАНИЗМОВ И ПЛЕСЕНЕЙ

Л. ВЬЕХЕТ ЧЕХОСЛОВАКИЯ

В настоящее время уделяется большое внимание изучению ис­пользования прополиса, не только в сельском хозяйстве, но и в химии и медицине. Меня прополис заинтересовал не только как пчеловода, но и как миколога, так как я работаю в промышленности антибиоти­ков. Здесь, я приведу только ориентировочную, первую часть нашего большого исследования, которое безусловно имеет и недостатки.

Прополис — натуральный пчелиный продукт, который — цити­рует из «Дер Имкерфрейнд» — содержит около 55% смол и клейких веществ, 10% летучих масел, 30% воска и 50% пыльцы. На холоде прополис представляет собой твердое и хрупкое вещество, в’ тепле он становится мягким, пластичным и очень клейким (прилипающим). Как утверждает БРЕННЕР, цвет его каштановый или красноватый до зеленого. На бактерицидное свойство прополиса — по ШМИДУ — большое влияние оказывает источник, из которого он происходит. ВИЛЬЯНУЭВА и сотр. указывают, что самая активная составная часть прополиса представлена галангином, соответственно 3, 5, 7- тригидроксифлавоном. Кроме того, еще в 1972 г. были известны — по ЛАВИ — флавоны хризин и тектохризин. Эти флавоны содержатся всегда в клеях тополевых почек. Поэтому будет правильным предпо­ложить, что прополис происходит из почек деревьев.

Методика опыта

Цель опыта заключалась в оценке бактерицидного действия про­полиса на некоторые виды микробов, плесеней и дрожжей. По систе­ме Бергея для классификации бактерий мы определили следующие виды : из отряда ЕиЬасЬегМез : Езскеггскга сой 9637/37, Мгсгососсиз /йтоив АТСС 10 240, Мгсгососсиз 1узоЛегсНсиз АТСС 4698, 8Ьарку1осос- сиз аигеиз Р-1485, Загсгпа 1и1еа АТСС 8 314, ЗХгерЬососсиз сгетопз ШЯБ 185, СогупеЪасЬепит едш ВС С8АУ 184, ВасШиз Искепг^огтгз, ВасШиз зиЫШз ВЬ 750 2 д, ВасШиз аШгасоШез.

из подтипа ЕитусоркуЬа: Еизапит зо1апг 257, АзрегдШиз оскга- сеиз 511 ;

из дрожжей семейства ЕпйотусеЫсеае (ЗасскаготусеЫсеае):

8асскаготусез сегеогзгае АТСС 2611 ;

из семейства СгурЬососсасеае :

КХоескега аргсиЫа ВС С8АУ и СашШа сйЫсапз.

Работа проводилась в три этапа :

На первом этапе изучалось общее влияние прополиса на тести­рованные виды бактерий, плесеней и дрожжей.

На втором этапе опыта уточнялось бактерицидное действие про­полиса.

На третьем этапе определялась эффективность прополиса по сравнению с антибиотическим действием пенициллина и фунгицидина.

Прополис, использованный в опыте, происходил как из северного пригорода Праги так и с Жизерских гор. В качестве растворителя использовали 96%-ный этиловый спирт. Соотношение между пропо­лисом и этиловым спиртом было всегда 1 :3, так как такая пропор­ция обеспечивает быстрое растворение и предотвращает насыщение раствора. Прополис с этиловым спиртом налили затем в колбу Эрлен- мейера на 300 мл и закрыли пластмассовой пробкой; колбу помести­ли в мешалку, где жидкость перемешивалась при температуре 31°Ц в течение 36 часов, в темноте. Затем содержимое колбы профильтри- ровали через бумажный фильтр для удаления механических частиц и нерастворившегося прополиса. Раствор прополиса в этиловом спирте хранили в темноте при 12°Ц. Для обеспечения гомогенности проб, на каждом этапе исследования всегда готовили только одну дозу про­полиса, растворенного в этиловом спирте.

В качестве первоначального бактериологического материала использовали микробы, лиофилизированные на лошадиной сыворотке, а в качестве первоначальной культурной жидкой среды — бульон глюкозы. Бактерии культивировали 24 часа при температуре 37°Ц, плесени — 10 дней при 31°Ц, дрожжи — 48—72 часа при 25°Ц. В бульоне культуру держали на холоде и всегда использовали лишь в течение нескольких дней. Для последующего хранения культуру высе­вали на наклонном эндоагаре, культивировали некоторое время и затем хранили при — 5°Ц. Из законсервированной таким образом культуры можно брать микроорганизмы и снова высевать на глю- козном бульоне. Для опытов использовали твердые среды, в большин­стве случаев агар-кровь. Для определения относительной эффектив­ности по сравнению с антибиотиками применяли эндоагар. Для пле­сеней применяли среды Сабуро.

Бумажные фильтры и другое оборудование стерилизовали в сте­рилизаторе теплым воздухом при 160°Ц в течение трех часов.

Результаты опытов

Часть I

Для определения чувствительности микроорганизма к прополису использовали бумажный фильтр размером 205 мм и кружки диаме­тром 10 мм. Бумажный фильтр и кружки увлажнили раствором про­полиса в этиловом спирте, но так, чтобы раствор не стекал на твер­дую среду. Одновременно с чувствительностью к прополису опреде­ляли и чувствительность разных видов микроорганизмов к этиловому спирту. Результат оказался отрицательным.

Таблица 1 РЕЗУЛЬТАТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЕзсНепсЫа соИ Л Мгстососсиз + + Мгсгососсиз 1узойегсИсиз + + + . 3{арНу1ососсиз аигеиз + + + Багета Шеа + 31гер1ососсиз сгетопз + + + СогупеЪас&епит едш + + ВасШиз ИсЛеп^огтгз' + + + Вас Шиз аШгасогбез Л ВасШиз зиЫШз -1- Тизапит зо1ати + АзрегдШиз осНгасеиз + ЗассНаготусез сегегшае + + К1оескега аргсиШа + + + СагиШа аШсапз + + + Примечание : + + + максимальная чувствительность + + средняя чувствительность 4- минимальная чувствительность

Часть II

Большинство микроорганизмов первой части опыта были исполь­зованы и во второй части, в которой установили точно бактерицид­ный эффект прополиса. Эффективность прополиса определяли при помощи метода Хитлея, с использованием Остальных роликов диаме­тром 7,5 мм и установлением ингибирующих зон.

Таблица б Ввд Температура *Ц 40 60 во 100 81арНу1ососсиз аигеиз 10,0 10,0 9,0 9,5 Загсгпа 1и1еа 11,0 12,0 11,2 11,0

Результаты приводим в таблице 2.

Ввд Ингибирующая эова. ММ Мгстососсиз 1узобМс1гсиз 12,0 10,0 10,0 9,2 9,0 8(арНу1ососсиз аигеиз 12,4 9,5 10,0 10,2 83 Заг&па 1и1еа 10,0 12,0 9,2 10,5 11,0 5{тер*ососси* сгетогЫ 9,0 9,2 0 9,5 8,8 СогупеЪасгеНит еди! 9,0 13,0 10,3 9,5 11,1 ВасШиз НсНепЦогти 10,0 9,0 9,5 8,0 0 ВасШиз гиЫШз 10,8 12,2 11.8 13,5 11,5 СатиШа а1Ысапз 9,0 8,0 9.0 0 8,5 РизаНит *о1ати 8,8 13,0 14,0 10,2 11,0 АзрегдШиз осНгасеиз 10,0 12,0 12,5 12,5 12,5 8ассЛаготусез сегеиМае 11,0 10,0 9,8 9,5 0 К1оескега агНсиШа 10,0 12,0 9,5 9,2 0 Таблица 3 В в д Концентрация прополиса в атялоаом самртв 1 : 1 1 : 3 1 : 4 1 : 6 1 : 10 ВасШиз зиЫШз 10,0 10,0 11,0 10,0 9,5 Загсгпа 1и1еа 10,0 11,0 10,0 10,0 8,5 81арНу1ососсиз аигегм 10,0 10,0 10,0 9,8 9,8

Таблица 2

Таблица 4 В в д Ингибирующая аоаа, вм ЗассНаготусез сегеиШае 10,8 10,8 11,0 11,5 ЗЬарНу1ососсиз аигеиз 10,0 10,0 ; 10,2 9,5 СогупеЬасЛег1ит еци1 10,5 10,0 10.8 10,5 ЗагЫпа 1и1еа 10,5 9,8 10,0 10,8 Для определения термостабильности прополиса провели ОПЫТЫ

при помощи нагревания прополиса, растворенного в этиловом спирте (1:3), в водяной бане, в четырех пробирках, нагретых до 40, 60, 80°Ц и, соответственно, 100°Ц. Нагревание продолжалось 3 минуты. Результаты приведены в таблице 5.

Определение концентрации прополиса в этиловом спирте произ­вели на ВасШиз зиЫШз, Загсгпа 1и1еа и 81арЬу1ососсиз аитеиз. Результаты можно видеть в таблице 3.

Для определения возможной диффузии прополиса разведенного в этиловом спирте, после добавления воды, провели опыты с ЗассНа- готусез сегеишае, 81арку1ососсиз аитеиз, СогупеЪасЪепит е^и^ и Затста 1и1еа.

К 9 мл раствора прополиса в этиловом спирте (отношение 1 :3) добавили 1 мл дистиллированной воды. Результаты приведены в таблице 4.

Часть III

В этой части работы определяли относительный эффект пропо­лиса, по сравнению с антибиотиками. При сравнении пенициллина и прополиса использовали 81арку1ососсиз аигеиз. Результат получился отрицательный, вероятно был тестирован устойчивый штамм. Пропо­лис создал ингибирующую зону, а пенициллин нет. Поэтому мы использовали ВасШиз зиЫИгз.

Опыт провели на пластинке большего размера, на которую в эндоагар ©вели культуру микроорганизмов, культивированных в бульоне. На эндоагаре разместили 7 роликов с прополисом, раство­ренным в этиловом спирте (отношение 1 :3) и пенициллин 16, 8, 4 е. Культуру держали в термостате при 37°Ц. Результаты приведены в таблице 6.

Таблица 6 Использованное вещество Ингибирующие зоны. ММ Прополис: этиловый спирт 12,2 14,0 13,5 14,0 12,5 12,5 12,8 Пенициллин 16 е. 12.2 12.4 12,3 12,4 12,6 12,5 12,4

При установлении действия прополиса по сравнению с действием фунгицидина был использован как микроорганизм для тестирования Засскаготусез сегеюгзгае. Концентрация прополиса в этиловом спирте была 1:3; фунгицидин — 100 е, 50 е и 25 е. Результаты приведены в таблице 7.

Таблица 7

Использованное вещество                                            Ингибирующие зоны, мы Прополис : этиловый спирт 12,2 12,6 12,5 12,4 Фунгицидин 100- е 20,0 20,0 Фунгицидин 50 е 17,3 17,0 Фунгицидин 25 е 12,5 « 7 12,5

Результаты и обсуждение

В работе мы хотели выявить антимикробное действие прополиса на некоторые виды микроорганизмов. Его антимикробное действие было доказано многими авторами. ЛИНДЕНФЕЛСЕР считает, что он оказывает общее бактериостатическое и фунгистатическое воздей­ствие, главным образом на грамположительные бактерии. Прополис не действовал ни на одну из двух испытанных дрожжевых культур.

Из проведенных опытов установлено, что прополис оказывал бактерицидное действие на большинство испытанных микроорганиз­мов, в особенности на грамположительные кокки Мгсгососсие 1узо-

ЛегсИсиз, Багета 1и1еа, 81арку1ососсиз аигеиз, на грамотрицательные бациллы — ВасгИиз зиЪНИз, на грамположительные — СогупеЪасЪе- пит, щиг, а также на некоторые виды плесеней — АзрегдШиз оскга- сеиз и дрожжей — Басскаготпусез сегетШе.

Разные концентрации прополиса в этиловом спирте не обнару­жили существенного различия — до концентрации 1 :10, имевшей самую низкую эффективность.

Не установлено разницы между действием прополиса, раство­ренного в этиловом спирте, и прополиса в растворе этилового спирта, разбавленного водой.

В серии опытов, проведенных для определения термостабиль­ности прополиса, достоверных различий не отмечено. Можно предпо­лагать что прополис является термостабильным веществом. Это его свойство было выявлено и КИВАЛ КИНОЙ.

Относительный бактерицидный эффект прополиса соответствует бактерицидному эффекту 16 е пенициллина и 25 е фунгицидина.

Следует отметить, что на результаты проведенных испытаний могло повлиять — скорее отрицательно — одно из свойств прополиса, а именно его растворимость в спирте, по сравнению с его возможной растворимостью в воде. Мы считаем, что несмотря «а то, что испаре­ния этилового спирта из роликов удалось относительно эффективно избежать (благодаря тому, что верхняя половина чашки Петри опи­ралась непосредственно на ролики), процесс испарения все же проис­ходил вследствие диффузии раствора в твердой среде. Этим же можно объяснить отрицательный результат полученный при испытании влия­ния этилового спирта на подопытные виды микроорганизмов. Были использованы максимально-точные методы титрования, так как даже очень небольшая концентрация этилового спирта в жидкой культуре имеет бактерицидное действие.

Во время этих опытов возникло много вопросов, ответ на которые безусловно дадут новые исследования. Мы хотели бы ориентировать исследования по определению действия прополиса на самый широкий микробный спектр с целью определения ценности этого вещества с фармакологической точки зрения.

ДЕЗИНФЕКЦИЯ РУК СТОМАТОЛОГОВ ПРОПОЛИСОМ

О. ГЕРМАН, М. РОДЕ ЮГОСЛАВИЯ

Резюме [2]

Стоматологи всегда подвергнуты инфекциям, а их руки являются одним из возможных источников заражения. Для защиты больных и их самих, врачи исполь­зуют многочисленные дезинфицирующие вещества, среди которых есть и препараты, вызывающие неприятные побочные эффекты. Для тестирования дезинфицирования рук прополисом нами использован 10%-й спиртовой раствор прополиса, который дал многообещающие результаты. Кроме спиртового раствора нами испытан в более удобный к применению прополисный крем.

СВОЙСТВА НЕКОТОРЫХ ПРОДУКТОВ ПЧЕЛОВОДСТВА,
СВЯЗАННЫЕ С ТОРМОЖЕНИЕМ РОСТА РАСТЕНИИ

м. гоннэ

ФРАНЦИЯ

1. Воздействие на рост ЬасШса ваИуа

' Резюме

Торможение роста растений некоторыми продуктами пчеловод­ства было выявлено и измерено при помощи биологического теста. Все вытяжки оказались активными; в убывающем порядке они явля­ются следующими: вытяжки меда, прополиса, воска, пчел, отложен­ной в улье пыльцы и пыльцы обножек. Самое значительное тормозя­щее воздействие оказано медом и прополисом. Обсуждение резуль­татов приводит к предположению что происхождение активных ве­ществ, присутствующих в продуктах пчеловодства является большей частью растительным. Однако пчела добавляет к ним, в определен­ных случаях вещества ингибирующие рост растений например во время сбора и складирования пыльцы.

Введение

Еще в 1960 г. мы показали что некоторые извлеченные из про­дуктов пчеловодства фракции тормозили прорастание семян некото­рых растений (ГОННЭ-ЛАВИ, 1960 г.). Говорили в ту пору о новом направлении в изучении этих веществ. Были уже известны противо- бактерийные свойства некоторых продуктов пчелосемьи, но было известно слишком мало об их тормозящем влиянии на рост растений.

Эти свойства не являются однако частным явлением. Из много­численных примеров исходит что некоторые вытяжки веществ расти­тельного или животного происхождения вызывают явления торможе­ния роста растений. Были определены, например ингибирующие фак­торы прорастания или роста различных органов растений, как напри­мер : корни НёНаШкетит, АркуИаЫкех, Рараоег, Ткутпиз, Козтпап- пи$ и т.д. (ВЕСКЕВ, СШУОТ, 1951 ; БЕЕЕШЬ, 1951) листья, стволы и почки ХапЬЫит, СепЫигеа, АШит, Ьусоргз, РЬе1еа, 8аИх и т.д. (КОШ8, 1947 ; ГЬЕТСНЕВ, ВЕЛЛЕУ, 1963 ; ЬАЛСЕ, КАПОТУ, 1965 ; САВЕ8Т1ЕВ и др., 1966 ; КЕРЕ1Л, 1966) фрукты и семена Ьусорегвг- сит, Угаа, Огуга и т.д. (КОЛ18, 1940 ; РЕУВОЛЕЬ, 1947 ; УАВСА, 1966). С другой стороны, вытяжки некоторых животных выделений проявляют также ингибирующее воздействие, так, стеролы, терпе- ноиды, гормоны и диастазы оказались активными по отношению к растениям (Ш8Т1С е* ТУАСНТЕЬ, 1939; В01ТЕА11 е* ВАТ51МА- МАЛСА, 1958 ; С12КОУА е* УЬВУСНОУА 1964; ШТБСН е* ЛГГЗСН, 1965; М1ЬСШ, 1966; ВАТ81МАМАЛСА, 1966; МАС ЬАВЕЛ е* ВВАЬГЛТЕ, 1966) ; слюна человека содержит вещество ингибирую­щее прорастание растений (УАВБЕЛ1, 1948) ; наконец, некоторые авторы изучили ингибирующий эффект антибиотиков на прорастание и рост растений (ВАВТОЛ, МАСЛАВ, 1954; Б11д1ТЕЗЛ013, 1955 ; ВН1АЛ и др. 1965).

У насекомых некоторые выделения оказывают значительное ингибирующее воздействие на рост растений; цитируем по РАУАИ (1958) ингибирующее воздействие оказанное на виды Ьир&лив а1Ьиз и АШит сера иридомирмецином извлеченным из 1ггйотуттех китШз, кантаридином выделенным Ьу1ка оезгсМогга, педерином произведен­ным Раейегиз /исгрез. По ЬЕМАУ (1947) пчелиный яд препятствует прорастанию семян. РАУАИ (1958) изолировал из выделяемого пче­лой вещества — маточного молочка — кристаллизуемое вещество, сильно ингибирующее рост растений вида Ьиртиз а1Ъиз. Наши пер­вые работы (СОГШЕТ, 1АУ1Е 1960) были выполнены используя рисовые зерна (Отуга заОоа) культивируемые на водяной вате. В воду которой орошали семена были введены вытяжки продуктов пче­ловодства в водном растворе. Использовали вытяжки прополиса, пыльцы, меда, воска, маточного молочка и целых пчел. Прополис и мед вызвали полное торможение прорастания риса. Другие испытан­ные вытяжки вызвали замедление роста растений по сравнению с орошенным водой контролем. БЕКЕУ1С1 и сотр. (1964) отметили тор­можение прорастания у СаппаЬгз заОоа; в состав используемых сред входят спиртные вытяжки прополиса. Эти авторы уделяли больше внимания в особенности тормозящему воздействию, более или менее значительному в зависимости от различных «качеств» используемого прополиса. В более новой работе (СОЫЫЕТ, 1966) мы уделили особое внимание действию прополиса. Мы изучили влияние последнего на семена латука (ЬасЫса заШа). Торможение выражается, в зависи­мости от изученных концентраций, замедлением или даже прекраще­нием роста проростков. Эта последняя работа привела нас к заклю­чению, что происходит торможение роста растений а не торможение прорастания зепзи з1пс1о так, как полагали указанные авторы.

Вследствие этих предварительных испытаний мы хотели более подробно изучить явления торможения роста растений вызванного находящимися в улье веществами.

Материал и методика

А. Природа и способ вытяжки некоторых извлеченных из улья веществ

Испытанные нами вытяжки были изготовлены следующим образом '

— Водная вытяжка прополиса (П-). Производится вытяжка 80 г прополиса при помощи дистиллированной воды в виде кипятка. Полу­ченную вытяжку концентрируют на водяной бане и затем фильтруют. 1 см³ этой вытяжки содержит 95 мг сухого вещества.

— Спиртная вытяжка прополиса (П₂). Производится вытяжка 80 г прополиса спиртом (1 час с отливом). Вытяжка фильтруется первый раз горячей а затем приспособлением Бюхнера второй раз в холодном виде, после оседания восков. Производится испарение спирта. Остаток растворяют в дистиллированной воде и охлаждаю! до 0°Ц, центрифугируют и фильтруют. 1 см³ полученного фильтрата содержит 50 мг сухого вещества.

— Спиртная вытяжка пыльцы обножек (Пп). 20 г пыльцы со­бранных от одной пчелосемьи обножек (улей № 225) растирают в ступке. Затем производится холодная вытяжка спиртом. Растворен­ный в воде остаток охлаждают до 0°Ц, центрифугируют, затем филь­труют. 1 см³ активного раствора содержит 118 мг сухого вещества.

— Спиртная вытяжка отложенной в улье пыльцы (П₃). Произ­водится вытяжка 20 г пыльцы, отложенной пчелами в том же улье (улей № 225). Затем все остальное проводят вышеуказанным спо­собом. 1 см³ вытяжки содержит 148 мг сухого вещества.

— Вытяжка меда (С₈). Речь идет о кислой омыляемой фрак­ции эфирной вытяжки меда. Способ получения этой фракции составит предмет подробного описания в другой работе. 1 см³ водного раствора содержит 3,3 мг сухого вещества.

— Ацетонно-спиртная вытяжка воска (С). 10 г старого воска подвергают теплому растворению в ацетоне. Производят частичное испарение ацетона ; затем производят вытяжку, растворение в спирте, отстаивание и фильтрирование. Спирт подвергают испарению; остаток растворяют в воде и отстаивают в холодильнике (0°Ц) в течение суток,' центрифугируют и фильтруют. 1 »см³ фильтрата содержит 154 мг сухого вещества.

— Спиртная вытяжка целых пчел (А). В течение суток настаи­вают на спирте 50 г пчел взятых из одного и того же улья (улей № 225). Затем производится вытяжка в течение 1 часа с отливом. После первого фильтрирования приспособлением Бюхнера, спирт филь­трата испаряют и остаток растворяют в воде. Выдержанную сутки в холодильнике вытяжку центрифугируют а затем вновь фильтруют. 1 см³ этого раствора содержит 270 мг сухого вещества.

Тормозящее рост растений воздействие этих вытяжек было испы­тано на рост латука (ЬасЫса ваИоа). Мы использовали материал и контрольные методы которые оказались удовлетворительными в наших первых испытаниях (ССШЫЕТ, 1966).

Б. Биологические испытания используя латук

Этот метод, уже использованный в нашей предыдущей работе, следует подробнее описать принимая во внимание тот факт что были введены некоторые улучшения.

Мы используем как культуральную среду агар 2% (в дистилли­рованной воде) к которой добавляют в разных концентрациях изу­чаемый раствор или воду для контроля. Эти смеси немедленно пере­водят в чашки Петри (диаметром в 10 см). Концентрация используе­мой на среде вытяжки выражена в мг (сухого вещества) на 1 см³ среды. Изучение концентрации этой вытяжки было проведено при помощи 3 чашек Петри, высевая по 100 семян в каждой чашке. Засев производится по мере возможности равномерно для облегчения после­дующих изъятий. Были использованы семена батавского латука (Па­рижский блонд). Рост происходит в сушильном шкафу при постоян­ной температуре в 25°Ц; относительная влажность помещения 80%. 16 часов после посева растения выставляют на свет в течение 30 ми­нут. Освечивание повторяется 5 раз в течение всего продолжения

опыта (например после 16, 24, 40, 48 и 64 часов). Источник освеще­ния состоит из 'двух флюоресцентных ламп по 40 ват каждая (Фи­липс, блан брияш). Освещение полученное на уровне каждой чашки равняется 1500 люкс.

Отсчеты производят через 70 часов после засева. Изымают из каждой чашки по 20 проростков, поступая следующим образом : с целью избежания предпочтительного выбора из совокупности семян, накладывают на чашку картоновый круг, диаметром в 10 см. На этом круге очерчивают и вырезают 5 кружочков по 2 см диаметром, рас­положенные на равном расстоянии между собой (расположенный цен­трально кружок окруженный четырьмя кружками, расположенными по краю большого круга). Пробы проростков изымают из каждого кружочка. Результаты выражены длиной гипокотилей и корешков (измеренных при помощи бинокулярной лупы) согласно отношений :    (Длина гипокот.) I"

(Длина гипокот.) Т

Полученные результаты

Все полученные вытяжки вызвали (при различных концентра­циях) прекращение или замедление роста растений. Схема (рис. 1) иллюстрирует сравнительную активность всех этих веществ.

По виду кривых выражающих инактивацию роста корешков проростков латука можно ингибировать что вытяжка меда (С₈) обладает очень выраженной ингибирующей силой (общее торможе­ние при использовании 0,030 мг сухого вещества на 1 см³ культураль­ной среды) ; за ним следует спиртная вытяжка прополиса (П₂) (все­общее торможение при 1,5—3 мг сухого вещества/см³). Другие веще­ства обладают более слабым воздействием (концентрации от 1 до 5 мг сухого вещества на см³ культуральной среды в случае частичных торможений), вытяжки пыльцы (главным образом пыльцы обножек) очень мало действенны (рис. 1).

Обсуждение и заключения

Все извлеченные из улья вещества обладают в различной сте­пени свойством торможения или замедления роста растений латука. Подчеркиваем интерес представляемый кислой омыляемой фракцией меда, тормозящей развитие проростков в очень слабых дозах. Вы­тяжки прополиса проявляют в равной мере значительную активность. Ингибирующая фракция присутствующая в прополисе подвергается легче вытяжке спиртом чем водой. Вытяжки пчел и воска обладают довольно слабым воздействием. Наконец, отложенная в ячейках пыльца выявляет пониженное действие; свежая пыльца обножек еще менее активна.

Было установлено, таким образом, что извлеченная из - тела пчелы фракция обладает слабым воздействием торможения роста растений по сравнению с активностью продуктов собираемых пчелой. Естественно это привело нас к предположению что вещества ингиби­рующие рост растений присутствующие в меду и прополисе, по мень- ео

(Длина корешка) I"

(Длина корешка) Т

П( П| Пз П| С А П|

1/80 1/100 1/200 1/500 1/(000 1/2000 1/5000 1/10000 1/20000 1/50000 1/00000 1/200000

1п Представляя разбавление в среде тормозящей вытяжки I а Т — контроль.

Полное торможение

в 0 0 О

_                          (Длина корешка) I

Соотношение -7=------------ ------- г-=—

(Длина корешка) Т

Вышеуказанное соотношение равняется прибл. 0.50 Вышеуказанное соотношение равняется нрнбл. 0.76 Удлинение сравнимое с контролем

Рис. I. Тормозящее воздействие прополиса и некоторых других продуктов пчеловодства на

корни латука

шей мере частично являются растительного происхождения. В настоя­щее время проводят ряд дополнительных работ результаты которых вскоре разрешат нам вывести заключения в связи с этой темой. Можно однако утверждать, что часть ингибирующих веществ проис­ходят из улья и являются животного происхождения. Пример пыльцы видимо подтверждает это. Мы показали что отложенная пыльца, уже смешанная с многочисленными слюнными выделениями и уплотнен­ная в сотах пчелами активнее пыльцы обножек которая претерпела лишь начало превращения. Следует напомнить в этом случае тот факт, что сбор этих разрядов пыльцы был произведен в том улье и в тот же период. Изъятые два типа проб были таким образом каче­ственно сравнимыми. С другой стороны было установлено, (МАШИ- 210 1966) что определенные слюнные выделения пчелы, включенные в свежую пыльцу (пыльца Рараьег ЪеЬиХа собранная ручным обра­зом) препятствует прорастанию и росту пыльцевых трубок. Указан­ным автором получены те же результаты, и в отношении спиртных вытяжек целых пчел. Таким образом, двойное происхождение и мно­жественность вещества ингибирующих рост растений оказываются видимыми у продуктов пчелосемьи. Это явление совсем не удивитель­но если учесть что как было показано, животные как и растения могут собирать в некоторых тканях вещества воздействующие на рост растений.

Наконец, это исследование дополняет наши знания о много­численных биологических свойствах продуктов улья и в равной мере является логическим следствием проведенных ЬАУ1Е (1960) работ, посвященных антибиотическим веществам извлеченным из продуктов пчеловодства.

ЛИТЕРАТУРА

ВАКТОИ, Ь. V., МАС ИАВ Л., 1954 — Е11ес1 о! апНЫоНсз ОП р1ап! ЯГОФШ. СопМЬ. Воусе ТЬотзоп 1П81. И8А, 17, 419—434.

ВЕСКЕН, V., ОЫУОТ, в., 1951. — Зиг 1е8 еохтез гас1па!гез Лез зо1з 1псиЦез. С.Н. АсаЛ. ЗсЬ, Ег., 232, 105—107.

В01ТЕАХ1, Р„ КАТЗШАМАКГСА, А. Н., 1958. — ЕЯесе Ле чиеЩиез зиЬзеапсез (гНегрепкщез ее зеёгоИчиез зиг 1а еегт1паЫоп Лез яга!пев ее 1е сго1ззапсе уеяееа1е. Ргос. 15-еЬ 1пеета11оп. Ноге1с. Сопя- И1се.

ВОИОЕ, Е. К., 1953. — СгоигеЬ ШЫЫеогз апЛ аих1п 1п 1еауез о! соске1еЬги РЬуа1о1. Р1апе., Оапет. 0, 234—239.

ВК1АИ, Р., IV. ее а!., 1905. — Ап 1пЬ1Ы1ог о1 р1ап! яготуНь ргоЛисеЛ Ьу АэрегеШиз \уепШ \№еЬтег. Иаеиге, 207, (5000), 998—999.

С12КОУА, 1., УЬНУСНОУА, М., КЦ21СКА, V., 1904. — ШЯиепсе о{ зегиш о1 сЬИЛгеп апЛ айо1езсепе ап 1Ье ЯготЬ о! р1ап1з. Иаеиге, 204 (4902), 1010.

ОЕЬЕШЬ, С., 1951. — Ог§1пе Лез зиЬзеапсез еох^иез Ли зо1 Лез аззос1ае1опз запз еЬёго- рЬуеез Ли Козшаг1по епсоп С.Н. АсаЛ. Зс1., Ег., 232, 2038.

ЯЕКЕУ1С1, А., а1., 1904. — КесЬегсЬез зиг сегеаШез ргорг1е*ёз Ыо1оя1чиез Ле 1а ргороИз. Апп. АЬеШе, 7 (3), 191—200.

О170иЕ8ИО13, Р., 1905. — Ьез апЯЫоЯлиез Лез р1апеез зирёйеигез Ви11. Зое. Ъо!.. Гг.. 102 (7—8).

ГЬЕТСНЕК, К А., НЕИИЕУ, А. 1., 1903. — А ёгошеь 1пЫЫеог ТоипЛ 1п Сепеаигеа ззр. СапаЛ. 3. Р1апе. зс1. 43, 4.

САВЕ8Т1ЕК, К., Н10ЕА11, М., СНЕИ1Е17Х, 3.-С., 1900. — Ргёзепсе Ле Гасееигз Ле сго!ззапсе ее Ле Тасееиг ЛЧпЫЬШоп Лапз 1ез ехегаНз {о11а1гез Ле Леих гиеасёез. С.Н. АсаЛ. ЗсЬ Гг. 202, 259—262.

СОННЕТ, М., ЬАУГЕ, Р„ 1900. — АсНоп ап11яепп1па11уе Лез ргоЛиНз Ле 1а гисЬе Л’аЬеШез зиг 1ез §га1пез ее 1ез еиЬегси1ез С.К. АсаЛ. ЗсЬ Гг. 250, 012—014.

СОИИЕТ, М., 1908. — АсЯоп 1пЬ1Ы1г1се Ле 1а ргороНа гёсоНёе раг ГаЬеШе (Ар1з гпеИШса) зиг 1а яегш1пае1оп ее 1а сго1ззапсе Лез]еипез р1апеи1ез сЬег 1а ЬаЦие (Ьасеиса зае1уа). с.к. АсаЛ. ЗсЬ Гг., 202, 2281—2284.

КЕГЕЫ, V. I., 1905. — ЬосаНзаНоп Лез 1пЫЬ1ееигз рЬёпоИлиез па(иге1з Лапз 1ез се11и1ез 1о11а1гез Ли заи1е. БокЬ АкаЛ Иаик ЗЗЗК 170 (2), 472—475.

КСЖ13, Е. — Оп 1Ъе асИоп 01 *егт1па*1оп 1пШЬШпв зиЪз1апсез 1п Ше (отХо 1ги11. Ра1ез1. .1. Во1. 2 (1).

КООД5, Е., 1847. — ТЬе ШМЬШлв ас*1оп о{ 1еа< вара оп 8егт1па(1оп апб 8го«ЧЬ. Ра1ез1, 3. Во*, 4 (2).

ЬАМСЕ, О. Ь., КАЫ20\У, Н„ 1965. — УГасЬз1итзЬеттип8 оп ЬбЬегеп РЯапгеп бигсЪ аЬ&е- (б(е В1аИег ипб 2ш1еЬе1п уоп АШит ига1пит. Пога, 0(асЬ, 1966 (1), 94—101.

ЬАУ1Е, Р., 1960. — Ьез зиЬз1апсез апМЬас1ег1еппеа йапз 1а со1оп1е б’аЬеШев (Ар1з теШ- Пса Ь.). ТЬёзе Рас. Зс1. Раг1з, ШКА 1—190.

ьемау, Р., 1947. — Зиг 1а аёсгёиоп розз1Ые б'апНЫоНциез раг сегабпз 1пзес1ез. Неу. Ра1Ьо1. НУ8- Оеп. 373, 089—590.

тзткз, в., \уаснтеь, к., 1939. — АсИоп а’ех1га11з б’огзапез <3ез ап1таих зиг 1а дегт1- пачоп бек р!атез. С.Н. Зое. В!о1. 132, 224—227.

МАС ЬАНЕГЧ, А. Р„ ВКАОРИТЕ, О. Е„ 1966. - . ШШЬШоп О* р1ап! вгошШ Ьу епгушез апб ЫзЮпез, РЬувоП. р1ап(., 19 (4), 1094—1100.

МА17К1210, А., 1956. — Ро11епке1тип§ Ьеттепбе 5<о1(е 1т кбгрег бег Коп18Ь1епе, 17е Соодг. 1псета11оп. Ар1сиНиге, Воювпе, Воте 2, 23—25.

М1ЬСОУ, 8. м., 1966. — СопШЬиНоп бе 1’ёсо1е гоита1пе б’епбосг1по1о81е й 1’ОМбе бе 1’асНоп без Ьогтопез ап1та1ез зиг 1ез р1ап(ез. Веу. гоитаШе В1о1., во*. 11, 339—343. М1ТЗСН, 3. р., ттзен. С., 1965. — ТегрепоМез па*иге1з асШз зиг 1а сго1ззапсе уёвё*а1е. Апп. РЬуз1о1. Уев. 7, 289—272.

РАУАГб, М., 1958. — Рг1т1 ба*е зи ип Гаиоге Н*о1пЫЫ*оге бе11а ве1а*1па геа1е 61 Ар1в теПИега ь. е зио 1зо1атеп(о а!1о з*а№ сг1з(а11по. АМ1 Зое. 11а1. Зс1. па*. 97, 163—166. РАУАЛ, М., 1958. — В1осЬет1са1 азрес* о7 1пзес* ро1зопз. 4*П 1п*ета*1оп. Сопвг. В1осПет.

12, 15—38. РЕУНСЖ1ТЕ1,, В., 1947. — 8и11а ргегепга пе1 1ги[3]1 61 У1с1о 1аЬа 61 зиЬз(апге 1пП1Ъ11Псе 6е1е 8егт1пагЮпе. Лиоуо С. Ьо(. 1[4]а1. 54, 772—774. КАТЗШАМА370А, К. е* а1. 1966. — 1п(егас11оп бе 1'асШе азсогЫчие е* бе 1а соШзопе зиг 1а сго1ззапсе без р1апШ1ез б’Егуит Ьепз .С.Н. Асаб. 8с1. Рг. 762, 756—758. УАНСА, М., 1966. — Оегт1па*1оп апб его*!!! 1пЫЬШпв зиЬ8«апсез 1п г1се 8га1пз. Ас1а.

108, 62—63.

Ыо1. Зге. 12, (1—2), 73—79.

УАМЭЕт, Р„ 1948. — Ниш ап заИуа аз 8егт1па*1оп 1пП1Ы*ог. 8с1епсе. Ч.5.А.,

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОПОЛИСА

Аделина ДЕРЕВИЧ

РУМЫНИЯ

А. ХИМИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ПРОПОЛИСА

Введение

В последние десятилетия большое развитие получило лечение прополисом благодаря хорошим результатам при терапии целого ряда заболеваний. Об этих результатах свидетельствуют доклады и сооб­щения на конгрессах и симпозиумах (5), (6), (7), (27), (28),

(29), (30)*.

Часть этих материалов была опубликована в сборнике «Пропо­лис», вышедшем в издательстве АПИМОНДИИ в 1975 году (26).

Сборник является ценным источником информации. Он содержит материалы по самым разным вопросам. Особое внимание заслужи­вают работы по биологическим и клиническим вопросам, а также ин­формация о препаратах из прополиса.

Доклады БРЭИЛЯНУ (3), (4), ВЕЛЕСКУ, МАРИНА (32) от­крывают возможность стандартизации разных форм применения про­полиса как «медикамента» на основе законных санитарных норм страны.

Мы попытались в свою очередь внести вклад в расширение зна­ний о свойствах прополиса и флавоноидов — его главных компонен­тов. С этой целью мы провели исследования, в которых приняли уча­
стие многочисленные биологи и химики. Результаты этих исследова­ний мы приводим ниже в соответствии со следующей схемой :

1.    Химические и физико-химические исследования ;

2.    Исследования «т шуо* и «гп юНго».

Химические и физико-химические исследования

а)    В первой серии исследований, при техническом сотрудниче­стве СОРУ (10) мы определили ряд химических свойств прополиса. Применение ряда растворителей позволило определить наличие раст­воримых в хлороформе фракций, после испарения которых остается осадок в 90,36 на 100 г.

В хлороформных вытяжках растворяются липиды, компоненты темного цвета и соединения с запахом амбры, характерным для фла- воноидного соединения. Этот осадок подвергали экстрагированию ме­танолом и после испарения опять остается осадок в 4,73 г на сто. Третье экстрагирование после двух предыдущих оставляет еще мень­ший осадок (3, 16 г/100).

Все эти осадки составляют 98,25 г на 100 г прополиса. Тоталь­ный азот в нем составляет 0,400 г на 100 нативного прополиса. Кис­лый гидролиз последнего при помощи хроматографии на бумаге Ват­мана выявляет восемь аминокислот, а именно: 1) серии, 2) глико- коль, 3) аспарагиновую кислоту, 3) глутаминовую кислоту, 5) ала­нин, 6) триптофан, 7) фенилаланин и 8) лейцин. Следует отметить, что три из них являются незаменимыми аминокислотами.

В теплой водяной вытяжке прополиса колориметрические методы для флавоноидов дали положительные результаты.

б)    Другие химические и физико-химические последования по про­полису проводились БОЕРИУ и ДЕРЕВИЧ (1), которые использовали хлороформный осадок, полученный в предыдущей работе, или сырой прополис. Хлороформный осадок, обработанный ацетоном, а затем метанолом и подвергнутый круговой хроматографии, образовал 11 пятен.

В сыром прополисе, обработанном рядом органических раство­рителей и подвергнутом электрофорезу на желе полиакриламида, обнаружили 9 фракций.

В качестве положительных химических реакций отмечаем коло­риметрические реакции для флавоноидов, а именно с орцинолем.

в)    ГРОЗА, БЛООС, ДЕРЕВИЧ (23), использовав японский ав­томатический аппарат с замкнутой цепью для определения амино­кислот, идентифицировали на гидролизате прополиса 8 аминокислот, в том числе 7 незаменимых, восьмая аминокислота — триптофан — этим аппаратом не идентифицируется.

Сырой прополис, использованный в наших опытах, был получен из разных областей страны. Цитируем ряд докладов исследователей, определивших флавоноиды в местных растениях. ТАМАШ (31) иссле­довал чернику (Уасстшт тугЫИиз и Уассхпшт о»йа Шеа) МИХЕЛЕ (25) — Нгегасгит аигапНсит, КОНСТАНТИНЕСКУ и сотрудники (8) — 1пи1а иИдтоза.

КРИСТЯ и сотрудники (9) выявили в спиртовой вытяжке ТИга атдепЬеа 17 аминокислот. Как известно, спирт экстрагирует фла- воноиды.

Из всех этих работ вытекает, что прополис имеет комплексную структуру. Для идентификации упомянутых фракций необходимо про­должение исследований.

Исследование прополиса т уНго и т угуо.

В ходе исследований ДЕРЕВИЧ, ПОПЕСКУ и ПОПЕСКУ (13), (14), (17) использовали водноспиртовую суспензию прополиса, в ко­торую входит вытяжка прополиса, полученная с помощью этилового спирта. Последнюю получают путем мацерирования небольших кусоч­ков сырого ирополиса — 25 г в 100 г 85-градусного спирта. Исполь­зуют герметично закрытые банки из темного стекла. Содержимое вы­держивают при комнатной температуре в течение пяти дней и встря­хивают несколько раз в день. Затем их больше не встряхивают и дают осесть нерастворимым в спирте частицам и инородным телам. Получают прозрачную коричневатую жидкость, которую хранят в хорошо закупоренных бутылках, в защищенном от света и тепла месте. Чтобы выявить количество активного вещества, определяют сухое вещество осадка в 100 мл вытяжки. Это количество колеблется в различных пробах от 8 до 10 г на 100 г вытяжки. Таким образом мы узнаем дозу активного вещества, использованную для изготовле­ния водноспиртовой эмульсии с ровным молочным цветом (физиоло­гический раствор не применяют, так как при этом получаются пре­ципитаты).

Обычно мы еще испаряем 2/3 спиртовой вытяжки, а подопыт­ному контролю обеспечивают соответствующую концентрацию этило­вого спирта.

ДЕРЕВИЧ, ПОПЕСКУ и ПОПЕСКУ (17) (18) установили пере­носимость 1,05 г/кг живого веса активного вещества для мышей, мор­ских свинок, кроликов.

У пчел, которых кормили медом, смешанным с 20% водноспир­товой эмульсией, наступает паралич, за которым следует смерть (рис. 1).

Соответствующая доза спирта нетоксична для контрольных пчел. Антибиотические свойства прополиса были установлены по отноше­нию к ряду видов колибацилл — дезинтерии и тифа, но не по отно­шению к стафилококку Оксфорда и 5. зиЫШз шезепЬеггсиз (13), (14).

Для титрования антибиотической способности эти исследователи предлагают использовать технику предельных растворов по отношению к РазЪеиге На аш$.

Прополис не предупреждает поражения пчел, зараженных путем скармливания меда и пыльцы кукурузы, пораженной АзрегдШиз пгдет и Мисог тписейо (15) (16). В желудке этих пчел появляются спорангии и гифы, хотя зернистый прополис встречается в макрону- клеоцитах, гемолимфы пчел (17) (18) (рис. 1а).

Летучие вещества, выделяемые в заселенном пчелами улье, ока­зывают ингибирующее влияние на аэрофлору близ улья.

65

5 — Прополис

Число колоний, выращиваемых на агаре или среде Чапека для плесени меньше, чем в случае культур, отбираемых на расстоянии 200 метров от улья, в саду или в городе (13) (14).

Водноспиртовая вытяжка прополиса обладает ингибирующим воздействием на прорастание конопляных семян (13), (14), а также на выращивание гриппозного вируса (24). Эти результаты отличаются от контроля, для которого используют такие же количества раз­бавленного спирта.

ДЕРЕВИЧ и. ПОПЕСКУ изучали (19) воздействие прополиса на опухолевые клетки асцит-карциномы (рис. 2). Непосредственный контакт этих опухолевых клеток с водноспиртовой эмульсией вытяжки

Рве. I Мазок гемолимфы пчелы, которой скарм­ливали мед с прополисом. Гемоциты со­держат гранулы прополиса определен­ной рефракционной способности. Окраска по Мей-Грюнвальду X 1260 -г- (Деревин и сотрудники, 18).

Рас. 1а Споранги и гифы в брюшке пчел. Окраска железным гематоксилином X 800 (Деревич и сотрудники, 18).

Рве. 2

Опухолевые клетки Врлиха; некоторые клетки крупные и круглые, ядро более или менее зкецентрично, наблюдается аегломерация хро­матина, в обильной цитоплазме наблюдаются Подвижные рефригентные образования; другие клетки небольшие с небольшим количеством цитоплазмы, ядро занимает почти всю клетку. Вид под контрастно-фазовым микроскопом — нефиксированный материал X 500                                          (Деревич и

сотрудники, 19).

прополиса придает им прогрессивно модифицированный характер в зависимости от продолжительности контакта. После одночасового кон­такта при 37°С цитоплазма располагается в виде' пузырьков вокруг пораженного ядра. Клетки покрыты аморфным материалом, скрываю­щим структуру и аггломерирующим их. Морфологические изменения более значительны после трех часов контакта — аморфный материал включает большинство клеток в шероховатый слой. Это было устано­влено при помощи фазовоконтрастного микроскопа (рис. 3), а также материала, фиксированного и окрашенного по методу Мей-Грюн- вальда-Гимзы.

В опытах иг шуо на мышах ДЕРЕВИЧ, *СОРУ, ДИМА (20) установили ингибирующее воздействие водноспиртовой эмульсии про­полиса на жизненность опухолевой клетки Эрлиха. Серийные пассажи асцитовой жидкостью от животных, выживших при первом пассаже, остаются стерильными и в то же время тинкториальная афинность подлежащих инокулированию клеток оказалась пониженной.

Продолжая исследования по реактивности организма под влия­нием прополиса, мы провели ряд опытов на морских свинках и кро­ликах. В сотрудничестве с ЗАЛМАНОВИЧЕМ и АРДЕЛЯНУ (21) мы следили за эффектом в разных экспериментальных условиях, описан­ных ФИЛОТТИ (22). Морским свинкам ежедневно вводили в тече­ние 12 дней по 100 мг активного вещества, разбавленного в 10 мл дистиллированной воды (всего 1200 мг). В опытах на кроликах, под­вергнутых внутривенной иммунизации антигеном 8а1топе11а рагаЩг АО, вводили в пять приемов водноспиртовую эмульсию прополиса вну- трибрюшинно (всего 500 мг активного вещества). Контрольным жи­вотным вводили такое же количество спирта в дистиллированной воде, без прополиса. Опыты не показали стимулирования иммунных процессов развития антипаратифозных антител А.О. или повышения аллексич- ного титра.

Анализ лейкограмм подопытных животных указывает на увеличение по- линуклеарных нейтрофильных клеток, причем у морских свинок этот процесс был 'выражен сильнее. Лимфоциты уменьшаются, а моноциту уравновеши­ваются.

После умерщвления этих живот­ных брали пробы мезентериума по ме­тодике БОКЕ и ДЕЛОНЕЯ (2). После

Рае. з

Вид под контрастно-фазовым микроскопом X 500. Ас-
цитные клетки после 3-часового контакта, покрытые
аморфным материалом. В поле — рекдие тени клеток
(Деревин и сотрудники. 19).

Рис. 4

Цитоплазма с вакуолями, содержащими гра-
нулы прополиса. Окраска гематоксилин-эози-
ном X 1250 (Деревин и сотрудники, 11).

фиксации и окраски делали микроскопический анализ для уточнения этапов переноса от места инокулирования и процесса «клиренса» прополиса.

Рисунки указывают, что частицы водноспиртовой коллоидной эмульсии прополиса увлекаются капиллярными эндотелиальными клетками и появляются в виде гранул, окруженных кольцом. После целой серии этапов они распадаются на более мелкие гранулы, а в их метаболизацию вмешиваются макрофаги. Интраплазматически по­являются кажущиеся желудочные вакуоли (рис. 4). Доклад ДЕРЕ- ВИЧ, АРДЕЛЯНУ и ЗАЛМАНОВИЧ (11) посвящен результатам ги­стологического анализа органов этих же животных. Было отмечено, что в изученных срезах гранул прополиса не обнаружили, за исклю­чением мышей, которым давали прополис через рот (18). У последних установили также небольшую степень жировой дегенерации. Это ука­зывает на разную реакцию вида и на значение способа дачи про­полиса.

В ходе гистологических анализов особое внимание уделяли обна­ружению возможных морфологических изменений тератогенного по­рядка, но результаты не показали таких изменений. Таких же резуль­татов мы добились при сотрудничестве с АТАНАСИУ, ПЕТРЕСКУ и СТОЯН (12) при анализе срезов органов детенышей хомяка, иноку- лированных через 48 часов после рождения водноспиртовой эмуль­сией прополиса. Анализ произвели шесть месяцев после инокулиро­вания и за этот период у детенышей хомяка макроскопических пора­жений кожи не появилось.

Б. ОПЫТЫ И ВЫВОДЫ ПО МЕХАНИЗМУ ВОЗДЕЙСТВИЯ
ФЛАВОНОИДНОГО КОМПОНЕНТА

В данном сообщении мы рассматриваем важный компонент про­полиса, а именно группу флавоноидов, которая известна нам по иссле­дованиям химиков.

До появления сведений о структуре и реакциях, вызываемых этими веществами в организме, они применялись эмпирически.

В наших работах, выполненных в сотрудничестве с химиками, мы установили комплексность структуры прополиса и его флаво- ноидных компонентов: он содержит углеводы, протиды и липиды, что

Рнс. б

Спектрографическая кривая га- лангина, выделенного из про­полиса ; сплошная линия — га- лангин, пунктирная — синтети-

и сотрудники, 38).

лангин, пунктирная — синтети- ческий галангин (Виллануэва

может объяснить его способность участия в физиологических процес­сах обмена веществ.

По мнению СВЕНА (34) флавоноиды входят в состав раститель­ных пищевых продуктов.

Документальные данные опытов показывают разнообразные ас­пекты анализа флавоноидного компонента, содержащегося и в про­полисе (6).

ВИЛЛАНУЭВА и сотр. (38) выделили из прополиса ряд фла- воноидов, спектрографическая кривая которых аналогична кривой син­тетических флавоноидов (рис. 5). Выявление ГЕЙНЕНОМ и ЛИН- СКЕНСОМ (19) жирных кислот в прополисе и в смоле тополиных почек указывают на сходство хроматографических кривых. Это ука­зывает на один из важных источников, которым пользуются пчелы, при производстве прополиса.

Интерес к флавоноидиой группе вызвали работы ШЕНТА ДЬЕРДЬ (35, 36), который при помощи тотального цитрусового сока добился хороших результатов в лечении цынги главным образом геморрагической. Помимо витамина С он содержит и другой фактор, действующий синэргически, который он назвал витамином пермеа- бильности (Р) или цитрином.

Использование термина витамин в данном случае было опро­тестовано рядом исследователей и его заменили названием «биофла- воноиды» или «флавоноидные производные». В соответствии с мне­нием ПАРРО и КАНЮ (28) и на основе работ ГАЗАВА (29) счи­тают еще более подходящим термин «фактор С₂», чтобы подчеркнуть синэргизм его действия совместно с витамином Ь (9) (10) (11) (12).

В их воздействии на резистентность капилляров обе фракции цитрина дают двухфазную кривую, первую — адреналинового типа, продолжающуюся 24 часа и вторую появляющуюся 72 часа спустя (которая сохраняется несколько дней) (11).

Свойства флавоноидов

В работах, посвященных этой группе веществ, обращается- осо­бое внимание на то, что они способствуют уменьшению хрупкости и пермеабильности капилляров.

Одновременное воздействие многочисленных факторов влияет на функции сети кровеносных сосудов (32). Она представлена капилля­рами, артериями, венами и лимфатическими сосудами, распространен­ными по всему организму.

Анатомическая структура капилляров, которую много лет назад (24) считали простой, в действительности представляет собою слож­ный морфологический и функциональный комплекс. По новым поня­тиям оболочка клеток — не статическое образование, а непрерывно двигающийся липидно-протеиновый предельный слой. Он активно участвует в межклеточных процессах и в обмене межуточной жидкости.

Комплексный характер происходящих в капиллярах процессов определяется влиянием на них кровеносной системы в целом.

Разные структурные элементы отделяют кровяную плазму от внеклеточной жидкости. Это означает, что нельзя ограничить исследо­вание вещества, которым мы занимаемся, только лишь руслом сосу­дов, а следует распространить его на функциональную биосферу ма­лого круга кровообращения, где околососудистые мастоциты и нервы образуют функциональное единое с мелкими сосудами. В функцию русла капилляров вмешиваются химические посредники, от которых зависят нормальные периферийные гемодинамические условия, филь­трация и матричность капилляров. Они представляют собой место обмена между кровью и тканями, обеспечивают поступление пита­тельных элементов и удаление остатков. Все эти функции предпола­гают точную регулировку механизмов, координируемых центральной нервной системой.

Метаболизм флавоноидов

Далее мы проанализируем вклад исследователей в объяснение метаболизма флавоноидов, введенных в организм различными спо­собами.

Исследователи использовали разные флавонные производные, но мы попытались полностью охватить эту группу, независимо от осо­бенностей используемого прополиса.

Возникает вопрос, какова судьба флавоноидов, которые дают человеку или животным ? ГРИФФИС и БАРРОУ (14, 16, 17 и 18) считают, что флавоноиды подвергаются распаду под влиянием кишеч­ной микрофлоры. Аналогичные результаты получаются только при работе т уИго с микрофлорой.

Опыты на животных, выращенных в стерильных условиях при­водят нас к таким же выводам (15). ДЕЗ и САУЗИ (5) также отме­чают в своих работах роль кишечной микрофлоры в катаболизации флавоноидов.

ГРИФФИС и БАРРОУ использовали в опытах полусинтетиче- ский продукт, содержащий три флавоноидные производные с разной структурой, идентифицированные хроматографически согласно указа­ниям МАТАНЬ (23) и установили при этом появление метаболитов у инъектируемых внутрибрюшинно мышей. Они пришли к выводу, что процесс распада вызывают гепатические ферменты, а желчные пути являются ^каналом удаления получаемых метаболитов. В этих опытах в желчные пути вводили трубочку, что позволило брать пробы во время опыта. БОТ и сотрудники (2, 3), используя в своих исследо-

Ш 2 О >  О

РЕРЦИС АСЮ (з-те!Ьоху- А-Ьудгоху- стпатю рсИ)

01НУ0РО- САРРЕ1С АСЮ (з',4-с%с1гоху р11епу1ргорют'с аасО

01НУ0РО РЕРШЮ АСЮ (з-теИюху- 4-Иус1гохурМепу 1 ргорюп1С аасО

УАМ1ЬЫС АСЮ (з- те11юху-4-Пус1гоху;- Ьеп201С асгсО

САРРЕЮ АСЮ (з,4-сй11ус1гохуаппат1С аск!)

т-С01)МАР1С АСЮ (т-Ьудгоху- стпатю аа.с!)

т-нуороху- РНЕИУЬ РРОРЮМС АСЮ Р) '                 с\л/

т-НУОРОХУ . Н1РРУРЮ АСЮ °|

т-С01)МАР1САСЮ 61_иС1ШОМЮЕ

РЕР1)1_0У1_61_УС1МЕ

УАМИ.0У1_61_УС1№Е

о

Рис. б — Мочевые метаболиты кофейной кислоты (БОТ и сотрудники, /957, 2).

ваниях кофейную кислоту, отмечают большую серию продуктов ката- болизации, которые появляются и удаляются через мочу в виде фено­левых соединений (рис. 6).

Некоторые различия результатов объясняются видом использо­ванных животных и способом дачи флавоноидных производных. По всей вероятности, есть возможность оценить степень катаболизации по количеству выделяемых через мочу или фекалии фенолевых соеди­нений и установить показатель адсорбции за единицу времени. Опре­деления в крови указывают на большое число метаболитов в случае введения флавоноидов внутрибрюшинным путем.

В ходе метаболизации выделение распределяется между желчны­ми и мочевыми путями.                  /

Проанализированный полусинтетический продукт «Венорутон», содержащий производные рутозида разной растворимости (25) и назы­ваемый «Паровеном», устойчив к пищеварительным ферментам, однако, его гидролизуют микроорганизмы нижней кишечной флоры. ТАКАЧ и сотрудники (37) отрицают роль кишечной флоры в ката- болизации флавоноидов. Они пришли к этому выводу на основе ре­зультатов опытов на печени, изолированной от общего кровообраще­ния и содержащейся путем перфузии физиологического раствора, к которому дабавляли флавоноиды.

СИМПСОН и сотрудники (30) исследовали метаболизацию фла­воноидов микрофлорой рубца. Они считают рубец хорошим источни­ком микробной флоры, вызывающей деградацию флавоноидов в ана­эробных условиях. Этого не происходит если флору рубца пропускают через фильтр Зейтца.

БЕМ (4) цитирует в своей монографии, посвященной флаво- ноидам, целый ряд авторов, исследовавших метаболизм флавонных соединений. Сроки появления продуктов распада в моче варьируют: некоторые указывают 2—3 часа, другие — несколько дней. Это вполне объяснимо, так как разные авторы использовали разные способы дачи и разных животных : зайцев, морских свинок, крыс, кошек, собак.

КЛАРК и сотрудники в работе по метаболизму флавоноидов приходят к выводу, что только 1% из примененной дозы адсорбиру­ется, а остальная часть выделяется в неизмененном виде.

ШТЕЛЬЗИГ и РИБЕЙРО (33) в исследованиях по выделению флавоноидов установили что некоторые из них выделяются только через мочу, другие — через фекалии.

В отличии от влияния микрофлоры на расщепление флавонои­дов, изучением которого мы занимались, МАРКЕЛЛИ (22) отмечает способность грибка АзрегдШиз сапйШиз синтезировать флавоноиды при использовании специальных предшественников. Добавка в каче­стве предшественников глюкозы, метионина и фенолалани^а осуще­ствляется в начале ферментации. Наличие флавоноида устанавлива­ется при помощи спектра магнитного резонанса.

Генезис болезней кровообращения

Другая категория исследователей занималась начальными функ­циональными и морфологическими изменениями, способствующими возникновению отдельных заболеваний системы кровообращения — варикозов, атеросклерозов, ревматизма, хрупкости и повышенной пер- меабильности капилляров.

ЛАШТ (21) обращает внимание на необходимость обнаружения этих расстройств в первоначальной фазе с тем, чтобы можно было осуществлять эффективное лечение. Автор установил, что при вари­козах имеет место расстройство углеводного метаболизма. Он уста­новил также, что потребление кислорода фрагментами варикозных вен уменьшается в три раза. Выработка молочкой кислоты повыша­

ется. Анализ состава венозной стенки — протеинов, холагена и гексо- саминов — указывает на ряд изменений. Исключением является эластин.

НИБС (27) интересовался ролью ферментов, катаболизирующих полисахариды, а именно — глюкоуронидазы, Б-ацетилглюкозамини- дазы кислой фосфатазы, арилсульфатазы, гиалуронидазы и катепсина.

В варикозной вене активность этих ферментов повышена, за исключением катепсина. Автор приходит к выводу, что в основе вари­козов лежат расстройства метаболизма углеводов, вызывающие -не­устойчивость лизоцимных ферментов и освобождающие ферменты, способствующие расстройству метаболизма мукополисахаридов и, соответственно, являющиеся причиной ультраструктурных изменений холагена и эластина. И другие авторы занимались изучением изме­нений коньюнктивальной ткани, характерных для варикоза. ЦВИЛ- ЛЕНБЕРГ и сотрудники (42) прибегают к клеточным культурам эксплантата варикозной задней подкожной вены человека и бычьей вены задней ноги, а также яремной вены.

При использовании разных культур им удалось вызвать рас­стройства, похожие на происходящие в варикозной вене. Характерно постоянное появление пенообразного холагена, который рни назвали «ассоциированной с холагеном структурой» (АХС) в средней оболоч­ке бычьей вены на 14-й день после засева. На культурной среде появляется ацетилглюкозаминидаза и молочная кислота, однако, ак­тивность фермента слабее в гипоксидной и анаэробной среде. Авторы указывают, что эти процессы играют активную роль в мышечных клетках вены и АХС не появляется в культурах яремной вены, очень бедной мышечными клетками.

Чтобы получить этот эффект, авторы считают необходимым строго соблюдать условия рН. Добавка флавоноидов к культурной среде ингибирует АХС, который считают альтерированным мукопо- лисахарндом.

Продолжая исследования в условиях, вызывающих поражения, похожие на варикозные, ЦВИЛЛЕНБЕРГ-ФРИДМАН и сотрудники (41) инкубировали фрагменты коньюнктивальной ткани связок в вытяжках человеческой вены, коровьей матки, мочевого пузыря. Полу­чали такие же образования АХС в определенных условиях рН, рас­пад фибрилл и развертывание гелнкса. Аналогичная картина наблю­дается и в нормальной ткани, в структурах с характерными для вари­коза изменениями. Авторы оценивают как второстепенный эффект воздействие флавоноидов на ультраструктуры, исследованные с по­мощью полусинтетических препаратов Венорутона.

В исследованиях метаболизма, происходящего н артериальной стенке, ФИЛИПОВИЧ (7) прибегал к культуре сегментов аорты в среде с триглицеридами и выявил повышение потребления кислорода под влиянием добавки флавоноидов. Значительного влияния на произ­водство лактата не наблюдалось.

Изучением гликолитических ферментов в варикозных и нормаль­ных венах, которые содержались в саркоплазматических вытяжках, вытяжках задней подкожной варикозной вены, псоаса и сердечной мышцы, занимались МАТ АНЬ и АМУАР (23).

При применении электрофореза на крахмальном желе выявляют некоторые отличия в содержании протеинов и распределении лактат- дегидрогеназы, способствующей в основном, аэробному метаболизму.

Вместе с тем не было установлено различий- в активности гли- колитических ферментов. Усиление активности лизоцимных ферментов отмечал МИРКОВИЧ (26) в своих опытах по экспериментальному тромбозу у собак.

ЦЕМПЛЕНИ (40) объясняет локализацию атеросклеротических поражений в головном мозгу наличием ряда гемодинамических и ге­моррагических факторов, в том числе и местной гипоксии. Она спо­собствует освобождению гистамина и одновременно повышению пер- меабильности и разрыву околососуднстых мастоцитарных клеток. Ос­вобождение гистамина способствует отложению коллоидных частиц и липидов на сосудистых стенках на фоне модифицированной пермеа- бильности. Флавоноиды оказывают влияние на этот фактор, а зна­чит и полезны в предупреждении атеросклероза.

ПАРРО и ГАЗАВЕ (29) и ГАЗАВЕ (9, 10, 12 и 13) назвали эту активирующую фракцию витамином С₂. Этот фактор соперничает с ферментом отометилтрансферазой (Комт) действующей на первом этапе метаболизации адреналина (11). Флавоноиды соперничают с метаболическим процессом адреналина, временно препятствуют ему и, таким образом, продлевают воздействие. В этом процессе флаво­ноиды действуют как факторы экономии и охраны адреналина, и это воздействие осуществляется синэргично с аскорбиновой кислотой — конкурентом катеколордифенолтрансферазы — ортодифенола. Другие мнения по механизму воздействия флавоноидов сводятся к тому, что влияние на адреналин сказывается косвенно, путем стимулирования гипофиза и воздействия аденокортикотропного гормона (АКТГ) на надпочечные железы.

Утверждают также, что флавоноиды действуют непосредственно через стенку капилляров, способствуя вазоконстрикции прекапилля­ров. Закрытие прекапиллярных жомов может объясняться антиэнзи- матической деятельностью, а именно ингибированием фосфорилиро­вания аденозиндифосфатазы в аденозинтрифосфатазу, необходимую для расслабления мышц.

Обсуждение механизма воздействия флавоноидов считаем полез­ным заключить оценкой двух компетентных в этой области специа­листов. По мнению СОРУ (31) соединения с функцией витамина Р действуют как обратимая система по восстановлению кислорода в синэргиэме с аскорбиновой — дегидроаскорбиновой кислотой.

ШЕНТ ДЬЕРДЬ (35, 36), утверждал, что в процесс окисления вмешивается аскорбиновая пероксидаза и установил возможное со­действие витаминов Р и С.

При определенных состояниях недостаточности каждое из этих веществ отдельно взятое не является эффективным. Только при одно­временном введении они оказывают синэргическое воздействие.

Витамин Р на уровне обратимой системы окислительного вос­становления адреналина-адренохрома уменьшает скорость окисления и разрушает адреналин, играющий важную роль в капиллярной ре­зистентности.

Витамин Р, как система окислительного восстановления, может играть определенную роль в механизме переноса водорода. Путем такого воздействия витамин Р вмешивается в разные клеточно-дыха­тельные метаболические процессы, в метаболизм углеводов, протеи­нов, ионов и воды.

БЕЗАНЖЕ-БОКЕНЬ (1) утверждает, что по функциям группы флавоноидов можно сформулировать определенные гипотезы. Он счи­тает, что в растениях они способствуют окислительному восстановле­нию. ШЕНТ ДЬЕРДЬ согласен с тем, что флавоноиды участвуют в клеточном дыхании растений. Они тесно связаны с аскорбиновой кислотой.

Флавоноиды являются посредником в окислении аскорбиновой кислоты. Оксидазы действуют непосредственно, пероксидазы разла­гают перекись водорода, выделяемую при непосредственных окисли­тельных процессах, превращают флавоны в квиноны, которые в свою очередь окисляют аскорбиновую кислоту, чтобы вновь приобрести фенолевую форму и процесс окислительного восстановления возоб­новляется.

Полагают, что способность к катализации определяется феноле­вой природой флавоноидов. Их влияние на ускорение физиологических процессов, в которых участвует аскорбиновая кислота, говорит о том, что флавоноиды играют роль коэнзим. По нашему мнению следует иметь в виду хелатирующее свойство флавоноидов; они участвуют как конкуренты в целом ряде ферментативных процессов и, таким образом, влияют на обмен веществ, как это было описано ГАЗАВЕ и сотрудниками в вышеупомянутых работах.

В. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФЛАВОНОИДНОГО КОМПОНЕНТА
ПРОПОЛИСА В ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ ЦЕЛЯХ

В этой части мы не будем обсуждать данных о терапевтической ценности прополиса.

Содержательная документация по этому вопросу собрана в книге «Прополис», вышедшей в 1975 году в Издательстве АПИМОНДИИ.

Мы будем обсуждать: 1. результаты терапии флавоноидного компонента и 2. методы тестирования терапевтического эффекта.

Есть ряд противоречивых мнений о роли флавоноидов в общем метаболизме. Эти противоречия еще не объяснены биохимиками, кото­рые выявили метаболиты флавоноидов в моче, желчи или фекалиях. ЖИЛ и ГУММА (21) выявили в сыровотке добровольных пациентов наличие ряда флавоноидов, которые давали им в виде таблеток. Они использовали методику ТИСА и ФИШЕРА (50).

ЛАПАРРА и сотрудники (28), использовав авторадиографию, обнаружили в органах мышей флавоноид, меченный изотопами.

ДЕРЕВИЧ и сотрудники (18) путем гистологического анализа вскрыли последовательные этапы участия прополиса в метаболизме вплоть до образования энзиматических вакуолей.

Для объективной оценки свойств флавоноидов гистологи исполь­зуют ряд методов, с помощью которых вызывают у животных нару­шения кровообращения, а затем лечат их флавоноидными произ­водными.

ПРАТЕСИ и сотрудники (43) провоцировали региональную ише­мию путем лигирования внутренней сонной артерии. После определен­ного промежутка времени берут пробу коры головного мозга, ультра- структуру которого подвергают анализу. Пробу коры головного мозга берут и у контроля (кролика). 12 часов после лигирования внутрен­ней сонной артерии устанавливают сужение капиллярного просвета, сгущение цитоплазмы. В строме появляются многочисленные холаген- ные нити. У кролика, которого предварительно лечили 15 дней фла­воноидами и умертвили через 12 часов после лигирования обеих вну­тренних сонных артерий, обнаружили почти нормальную базальную мембрану, менее непроницаемую по отношению к электронам, чем при чистой ишемии.             ,

У кролика, которому вводили флавоноиды внутрибрюшинно до зами по 100 мг/день, обнаружили нормальные капилляры ; базальная мембрана при раздвоении включает многочисленные перициты. Кле­точные пределы и эндоплазматические органы — нормальные.

ЧЕТТА и сотрудники (1) лечат рядом флавоноидов поражения, похожие на варикозные расширения, вызываемые аминоацетонитри- лами. Он установил положительное -влияние на холаген и эндотелий небольших сосудов. На рис. 7 приведена средняя вариация раствори­мого холагена (в N8010 45 М) в аорте кролика, отравленного чиной и излеченного флавоноидами. Белая колонка представляет контроль, черная — количество растворимого холагена, возросшее у животных, отравленных ацетонитрилами. Заштрихованная колонка указывает на уменьшение количества растворимого холагена у животных, которых одновременно лечили флавоноидами.

ГАММЕРСЕН (15), чтобы изучить эффект флавоноидов, вызы­вает эдем у крыс с помощью декстрана. Флавоноиды дают до дек-

150*1 од/ЮО тд НЕ

Рис. 7

сотрудники, //).

Вариации растворимого холагена в аорте новорожденного кролика, отравленного чиной и подвергавшегося лечению флавоноидами Белая колонка — контрольный кролик; чер­ная колонка — кролик» подвергавшийся ле­чению ацетонитрилами; заштрихованная ко­лонка — кролик, которого лечили амино- ацетонитрилами и флавоноидами (ЧЕТТА и

страна, раньше, либо за 7 дней через рот, либо за час внутривенным путем. Перед умерщвлением вводят уголь для мечения поражений. Контрольным животным декстрана не дают. Пробы берут через час и через четыре часа после дачи декстрана.

Предварительная обработка флавоноидами способствует умень­шению числа наростов и толщины базальной мембраны.

Все же конъюнктивальная ткань нормализуется неполностью.

Для изучения влияния флавоноидов на явления недостаточности применяли разные методы.

Исследование капиллярной хрупкости и повышенной пермеабиль- ности находится в центре внимания клиницистов.

Хрупкость капилляров можно выявить путем положительного да­вления, временно приостанавливающего венозное кровообращение. Обычно в этих целях используют манжету аппарата для измерения давления крови. Считают пятна (небольшие подкожные геморрагии), появляющиеся на определенной площади и определяют время их появления. Можно прибегнуть к отрицательному давлению при по­мощи небольшого каучукового соска. В торговой сети можно при­обрести ангиостерометр Парро (40).

ВИЛЬД и ФАСЕЛ (57) прибегают к этой технике для выявления хронической венозной недостаточности с циррозом печени. Они опре­делили резистентность ректальной слизи и время, необходимое для появления пятен. Они сравнивают результаты, полученные до и после лечения флавоноидами (препарат Цима, называемый Венорутоном), и наблюдают продолжительность сроков до появления пятен после недели лечения.

ПАРРО и КАНЮ (40) наблюдали повышение резистентности капилляров по числу пятен, появляющихся после лечения разными флавоноидами.

Пермеабильноеть капилляров можно определить с помощью геста Ланди, воссоздавая венозную стазу манжетой аппарата для из­мерения давления предплечья и сравнивая результаты анализа крови каждого члена. Определяется количество жидкости вне сосудов, гема- токрит и количество протеинов в сыворотке.

Манжету выдерживают 30 минут на одной руке. Этот метод ис­пользовал ВИЗМЕР (58) на группах больных до и после их лечения флавоноидами. Было установлено уменьшение количества фильтрата и протеинов вне сосудов.

Воздействие флавоноидов на пермеабильноеть капилляров можно оценить тестом распространения красителя (обычно трипановая синька Эванса) на области, предварительно обработанной хлорофор­мом. Эту методику использовали ЛОАЗЛЕР и сотрудники (34), сде­лав два укола флавоноидом (флацитраном) — второй через 24 часа после первого, а еще через 6 часов ввели краситель. Установили за­медление распространения красителя под влиянием флавоноида, изго­товленного из цитрина с добавлением ионов магнезии.

ПАРИ и МУРИ (39) модифицировали эти методы. Для большей объективности определения появления и интенсивности окраски кож­ного покрова используют фотоэлектрическую ячейку, к которой прис­пособляют гальванометр для периодического измерения распростране­ния красителя. Был получен положительный эффект влияния фла- воноидов.

ГАБОР (20) выявил противовоспалительную роль флавоноидов и изучил их воздействие на пермеабильность капилляров методом распространения красителя Эванса (инъектируемого внутривенно) в возбужденной области.

Окрашенную кожу вырезают после декапитации крыс, очищают от жира, экстрагируют краситель пиридином и фотометрически оце­нивают количество красителя на известной площади.

Установлено уменьшение пермеабильности в связи с замедлен­ным распространением у групп, лечимых флавоноидами.

Другой способ изучения пермеабильности капилляров предложил КАЛ НАН (8). В целях определения степени фильтрования в межуточ­ной жидкости вводится подкожно капсула с отверстием, к которому приспосабливают систему отбора межуточной жидкости через разные промежутки времени. Можно установить значение ряда констант в отобранной жидкости и оценить, таким образом, пермеабильность капилляров.

Для исследования хрупкости и пермеабильности капилляров при глазных заболеваниях имеется ценное средство — флюоресцентогра- фия. Метод позволяет заснять флюоресценцию, появляющуюся на артериолах ретины.

Для инъекции раствора флюоресцеина необходимо тщательная подготовка (ТШОП, 53). Делают снимки через определенные проме­жутки времени. Можно использовать и цветные снимки глазного дна. Снимки позволят оценить эволюцию диабетической ретинопатии после дачи флавоноидов в сравнении с группой, которой дают плацебо. Кри­терием для оценки служит наличие микроневризмов и флюоресцеина вне сосудов.

По снимкам вычерчивают на кальке схемы артерий, вен, внесо- судистого флюоресцеина и микроаневриэмов. Схемы раздают несколь­ким врачам, которые отдельно записывают свои замечания. Затем они вместе сравнивают и обсуждают их.

В течение каждого периода лечения больным дают 400 мг НР три раза в день в течение двух месяцев ; плацебо дают два месяца, затем повторяют цикл НР [5]).

Авторы считают, что это объективный метод, позволяющий оце­нить эффект лечения. Новые геморрагии не появляются, но старые сохраняются. Наблюдают уменьшение пермеабильности к флюорес- цеину. Эффект сохраняется только во время лечения.

Для оценки лечения расстройств венозного кровообращения. КОВЕНБЕРЖ и сотрудники (10) используют производное рутозида «Венорутон-Цима». Один из методов вызова воспаления — подкожная имплантация ватного тампона, провоцирующая образование абсцесса. Группу лечили разными дозами флавоноидов — от 10 до 200 мг на 100 г

Другие исследователи — например ЛУНД и сотрудники (35) - в опытах с крысами вызвали эдем путем надавливания на основание хвоста. Они оценивают интенсивность эдема по перемещению воды в • присоединенном калиброванном цилиндре. ЛУНД и сотрудники оце­нивают таким образом нейтрализующее значение флавоноидов путем использования групп животных, к которым применяли или не приме­няли лечение НР. Для получения эдема авторы прибегают к уколам адреналином-эрготамином :в основание хвоста. После 12 часов начи­нается введение НР, которое продолжается через каждые 12 часов в течение 5 дней.

ТУЛЕСИУС и ГЬЕРЕС (52) исследовали вязкость крови у боль­ных с хронической венозной недостаточностью. Определяли вязкость до и после лечения в кубитальной крови и в крови, взятой из задних членов.

БРИТ и ЛАШТ (7) изучали значение появления побочного кро­вообращения после ишемий в результате отключения коронарного кровообращения и кровообращения задних конечностей. Авторы скон­струировали аппарат для графической регистрации механограммы. Она представляет собой ответ мышцы, в которой появилось побочное кровообращение. При опытах на сердце используют электрокардио­грамму. Обработка Венорутоном дала положительные результаты.

Другую технику исследования воздействия флавоноидов разра­ботали ШЛЕБУШ и КЕРН (49). Они основывались на сходстве между химической структурой флавоноидрв и полифенолов, исполь­зуемых в кожевенной промышленности (таннинов), что навело на мысль, что и флавоноиды могут действовать как стабилизаторы хола- гена. Известно, что холагеновые нити контр актируются, укорачива­ются и выделяют тепло и энергию, которые можно измерить специаль­ным аппаратом. По мнению авторов флавоноиды действуют как агент дубления подобно солям золота, используемым при лечении полиар- трозбв. Воздействие флавоноидов пропорционально концентрации.

Терапия флавоноидами

Терапию флавоноидами применяли к больным с заболеваниями, вызываемыми отсутствием этих веществ: при цынге, повышенной хрупкости ц пермеабильнЪсти сосудов, расстройствах кровообращения нижних конечностей, варикозных расширениях вен, атеросклерозе, эдемах и ожогах.

Для диагностики сосудистых заболеваний используют один или несколько из вышеупомянутых методов. Обычно работают с контро­лем, которым дают плацебо — инертное вещество, похожее по виду на исследуемое. Применялись полусинтетические продукты — произ­водные рутозида, получаемого из цветков желтой акации, другие пре­параты происходили из цитринов, иногда с добавлением металличе­ских ионов. Использовали также вытяжки ягод (черники, смородины и др.) или каштана.

Работа клиницистов, основывающаяся на объективных лабора­торных тестах, позволяет получить ценные выводы о терапевтической ценности исследуемых веществ.

Большинство исследователей настаивают на отсутствии токсич­ности у флавоноидов. Эти вещества хорошо переносятся организмом и при продолжительном применении больших доз.

Это свойство породило целый ряд идей по изучению терапии флавоноидами. Мы отметим лишь некоторых авторов этих идей ДЕМЮР (14) работал с дифрарелем — вытяжкой черники, КЛЕМАН (13, 14) — с цнтофлавоноидными продуктами, ПРЕРОВСКИЙ (44), КАППЕР (24), РАЗГОВА (45), КОВЕНБЕРЖ (9), МАКЭВАНС (36), ФИЛИППИ (19), ЛЕКОМБ и КОВЕНБЕРЖ ,(32) использовали по- лусинтетический продукт рутозида, называемый Венорутоном (55).

Последние авторы (32) выявили аминоосвобождающие свой­ства у ряда производных рутозида, меченного 2 — 4000, но только на крысах. Было установлено резкое понижение артериального давле­ния за которым следовало учащение пульса.

Авторы уточняют, что этих явлений не наблюдают у человека, для которого применяют другие производные рутозида.

ЛАГРЮ у сотрудники (25) исследовали нарушения кровообра­щения при атеросклерозе в случае повышенного артериального давле­ния (27), при которых добились значительного улучшения в 2/3 слу­чаев. Лечение через рот (100 мгX 3 за 24 часа) в течение трех недель продолжалось после трехнедельного же перерыва. Они использовали эксулозиды Ы (25), применяемые под названием фолескутол (26). В другой серии опытов РОУЗ добился улучшения субъективной симпто­матологии при варикозных расширениях вен и симптомах, появляю­щихся после флебитов ; он указывает на полезность флавоноидов в терапии расстройств кровообращения нижних конечностей.

ЛЕКОК рекомендует флавоноиды при пурпуре и других гемор­рагических заболеваниях (цынге), при которых первоначально появля­ются многочисленные экимозы, а также при гематурических нефри­тах, склерозе, повышении артериального давления, менструальных расстройствах и болезнях печени. ГЕТЦ (22) отмечает уменьшение холестерола и удовлетворительные результаты, полученные с помощью концентрина (препарата» из каштанов) при варикозных расширениях вен, варикозных язвах, тромбофлебитах. ПАРИ и МУРИ (39) кон­тролируют эффективность применения флавонов при расстройстве пермеабильности тестом распространения синьки Эванса с помощью электрорефлектометра, соединенного с гальванометром, и находят, что флавоноиды благоприятно влияют на повышенную пермеабиль- ность. Этот факт подтверждают АРТЮСОН (2), а также ДЕРЕВИЧ и сотрудники (17), которые при экспериментальных ожогах приме­няли водноспиртовую эмульсию прополиса, содержащую флавоноиды.

Данные о применении флавоноидов в офтальмологии указывают на возможность торможения эволюции заболеваний, среди которых преобладают ретинопатии.

ВЕГМАН (56) изучал роль ферментов в процессах приспособле­ния глаза к темноте, определяемого понижением абсолютного свето­вого порога после обработки флавоноидами. Авторы объясняют этот механизм путем конверсии неэффективных ультрафиолетовых лучей. С результатами АЛЬФИЕРИ согласны МАСКЕЛЬЕ н сотрудники (37), а также ПЕРДРИЕЛЬ (41), которые исследовали влияние цнтофла- воноидов на приспособление к световым вспышкам. НОЙМАН (38), ТОМАС и БОРИЗЕН (51) и РОМАНИ (46) лечат флавоноидами конъюнктивальные ангиопатин в случае предиабета и диабета. Препа­рат Дифрарель приготовляют из вытяжки черники. ПЕТЕРСОН и ХИТ (42) индуцируют ретинопатии путем лечения крыс нммуноди- пропионитрилами, которые ингибируют флавоноидами.

БАЙДАН и ОИЦЭ (3) используют при заболеваниях глаз растворы или мази прополиса на основе органических аминов. Хоро­ших результатов добиваются при роговнчноконъюнктивальных ожогах и блефароконъюнктивитах.

БЕЛЛИГЕР (5) успешно использовал флавоноиды и в дермато­логии в виде распылений применяя их при прурите, эритемах шполу­закрытых варикозных язвах. ЛЕКОК. рекомендовал их применение при пурпуре, ЛЕКЛЕРК — при псориазе (33).

Использование флавонондов для локализации опухолей дало хо­рошие результаты в опытах Б АЛАН ГЕРА и ДАКСА (4), а РУДАЛН и ЖУЛЬЯР (48) наблюдали ингибирование опухолевой диффузии под влиянием флавонондов у мышей, у которых образуются опухоли груди при непрерывной беременности. РУ ДАЛ И, ДЕШОМ н КУСТУ (47) добились этого результата при помощи магниевых хелатов флавонои- дов. По мнению БЕМА (6) хелатирование является основным меха­низмом воздействия флавоноидоаз. КЛЕМЕТСОН (12 и 15) считает, что в этом случае имеет место синэргиз.м с воздействием аскорбино­вой кислоты, причем флавоноиды по его мнению, являются фактором экономии этой кислоты, действующим при окислительновосстанови­тельных процессах.

ДЕЙСТВИЕ ВЫТЯЖКИ ПРОПОЛИСА НА ПОВЕРХНОСТНЫЙ
АНТИГЕН ГЕПАТИТА В СРАВНЕНИИ С ДЕЙСТВИЕМ
XИМИЧеСКИХ АНТИГЕНОВ

Юлиана ПРИШЛИ. Васшшка ЧОКЛ, Лина МОРФЕИ, О. БУРДУЧЛ, 11. К А ЖАЛ, Луиза ТЕЛЕГУЦА

РУМЫНИЯ

Реноме ■

Авторы занимались изучением эффекта водного экстракта прополиса на по­верхностный антиген гепатита В в сравнении с эффектом бромида нетнлпириднна н хлорамина Б. Очищенный АеНВз и А§НВ из кровяной сыворотки были подверг­нуты гп Ы(го действию вышеуказанных биологических и химических агентов раз­личных концентраций. Изучена серологическая деятельность А^НВв путем реакции нм.муноэлектроднфузнн (ЯЭД) и раднонммунодозировки (РИД). Было выявлено достоверное ингибирующее действие вытяжки прополиса и хлорамина на очищенный АёНВз, в отличие от АвНВз из неочищенных препаратов, который частично маски­рован химическими компонентами, содержащимися в сыворотке крови.

») Полный текст доклада на французском языке вы найдете в сборнике -.Шете 8ут- рпчШт 1гПетаПопа1 с1’арИЬегар1е- (III Международный симпозиум но апитерапии. Порторож. Югославия. 19Г8. изд. ДПИМОНДИИ. Щ7Ч)

---

[1] Полный текст доклада на французском языке вы найдете в сборнике ,ЛШте Зут- ровШт 1п1егпаиопа1 сГарНЬегар^е" (III Международный симпозиум по апитерапии. Порторож. Югославия. 1978, нзд. АПИМОНДИИ, 1979)

3 — .Прополис

[2] Полный текст доклада ва французском нанке нм найдете а сборнике „Шйте 8ут- роаШт 1п1етайопа1 <1’арЦПегар1е“ (III Международный самюэкум по анитерапни. Порторож, Югославия. 1978, над. АПИМОНДИИ, 1979)

автору

[4] Желающие получить литературу могут обратиться в редакцию или к

[5] Джеровитал НР.